분자유전실험 - 단백질 정제(Protein purification)

목차

Ⅰ. Abstract

Ⅱ. Introduction
1. 단백질 정제(protein purification)
2. Ni-NTA Agarose

Ⅲ. Material/Methods
1. Cell culture & E.coli proteinextraction
2. Purification
3. SDS-PAGE

Ⅳ. Results
1. 앞, 뒤 조의 전기영동 결과를 확인하고 설명하시오.

Ⅴ. Discussion
1. 결과에 대한 고찰(Description)
2. 단백질 생명공학 (Protein Biotechnology)
3. GEL Staining

본문내용

Ⅰ. Abstract

⇨ 이번 실험의 목표는 6his-tev-HSP17.7를 분리 및 정제하기 위하여 pET11a-HSP17.7의 soluble protein을 추출하여 여러 buffer를 이용해 purification 과정을 거치는 것이다. 그래
서 purification 각 단계(PS, F, W1, W2, E1, 2, 3, 4, 5)마다 e-tube에 처음/중간/ 끝에 해당
되는 단백질 시료를 얻어 gel 전기영동을 하고, 앞 조(1~3조)와 뒤 조(4~6조)의 결과를 비교
한다. 한편 GEL 전기영동을 위해 필요한 두 종류의 stacking, resolving gel을 제작하기도 하였다.
그 결과 앞 조에서는 gel 전기영동을 통해 PS단계에는 6his-tev-HSP17.7 band가 24bp에 나타난 것을 확인했고 F 단계에서 6his-tev-HSP17.7가 Ni column에 결합했음을 확인할 수 있었다. 그리고 W1, 2단계에서는 다른 단백질이 용출된 것을 확인할 수 있고 E 단계에서는 순도 높은 6his-tev-HSP17.7를 얻었으나 양이 적었다. 이를 통해 6his-tev-HSP17.7의 양을 많이 얻기 위해서는 Elusion 단계에서 이미다졸 처리를 충분히 해줘야 하며 Elusion 초반
부터 시료를 e-tube에 얻어야 한다는 것을 알 수 있었다.
뒤 조에서는 gel 전기영동을 통해 PS와 F단계에서는 앞 조와 마찬가지로 6his-tev-HSP17.7 band가 24bp에 나타난 것을 확인했고 Ni column에 결합했음을 확인할 수 있었다. 또 W1, 2단계에서는 다른 단백질이 용출된 것을 확인할 수 있고 E 단계에서는 많은 양의 6his-tev-
HSP17.7 단백질을 얻었으나 다른 size의 단백질이 나와 순도가 낮았다. 이를 통해 순도 높은 6his-tev-HSP17.7을 얻기 위해서는 Lysis와 Washing단계에서 이미다졸의 조성 비율을 높여줄 필요가 있다는 것을 알 수 있었다.
이 실험을 통해서 전기영동 후 흰 바탕의 GEL 상에서 24bp위치에 나타난 파란색의 6his-tev-HSP17.7 단백질에 해당되는 band가 앞, 뒤 조에서 양이 적거나 순도가 낮은 것을 감안하면 대체로 잘 purification 된 것임을 확인할 수 있었다.

참고자료

· 없음