Preparation of 2x SDS-Gel Sample Buffer

목차

1. Title
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion
6. reference
7. Q.Tris PKa는 8.0X → 이상적인 buffer range pH7~9 , 하지만 이번 실험에서는 pH6.8로 만들었습니다. 왜 그럴까요?

본문내용

Q.Tris PKa는 8.0X → 이상적인 buffer range pH7~9 , 하지만 이번 실험에서는 pH6.8로 만들었습니다. 왜 그럴까요?

A. 단백질 전기영동법 중,
SDS PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-polyacrylamide Gel Electrophoresis)
-이 방법은 아미노산 측 사슬끼리의 결합(S-S결합 등)을 절단하여 아미노산이 다수 연결된 단일사슬의 polypeptide 상태로 만든다. 이것으로 polypeptide 사슬이 길수록 gel의 망에 걸려 이동도가 작게 되고, 짧은 분자일수록 이동도가 크게 된다. 그러나 단백질은 그것을 구성하는 아미노산 조성의 차이에 따라 각각 특유의 전하를 가지기 때문에, 전압을 걸면 각각의 전하에 따라 이동하게 되고, 단백질의 크기(분자량)의 차이에 의한 분리를 할 수 없다. 거기서 샘플의 단백질의 Charge를 똑같이 (-)로 하기 위해 음이온성 계면활성제인 SDS를 단백질에 결합시켜, 각각의 단백질의 Charge를 거의 일정하게 만든 후에 전기영동을 실시한다. 이렇게 함으로써 단백질의 분자량의 차이로 분리하는 것이 가능하게 된다.
즉, SDS-PAGE는 질량의 차이를 이용한 분리방법으로, SDS를 이용하여 모든 단백질이 동일한 (-)Charge를 띄도록 만든 후 질량에 의한 polyacrylamide gel상에서의 이동속도 차를 이용하여 분리하게 되고, 이 때 sample buffer에 DTT나 mercaptoethanol이 첨가되어 있어 disulfide bond도 끊어지게 되어 단백질은 1차구조를 형성하여 이동하게 되는 것이다.

참고자료

· 줌달의 일반화학/Zumdahl/화학교재연구회/2011/p.75~76
· 생물학용어사전/정용재/이학전사/1999/p.38~183