유전자 재조합 단백질의 정제

목차

1. 9R-1. Affinity chromatography, Ion chromatography, gel chromatography를 각각 설명하라.
2. 9R-2. Protease inhibitor의 종류와 사용방법을 설명하라.
3. 9R-3. 단백질분리정제에 이용되는 fusion tag의 종류와 특성을 설명하라.

본문내용

9R-1. Affinity chromatography, Ion chromatography, gel chromatography를 각각 설명하라.

Affinity chromatography

서로 생물학적으로 높은 특이적 친화성을 갖는 2종류의 물질중 한 쪽을 고정상으로 사용하여 그 고정상에 대한 친화성의 차이를 이용해 목적물질과 불순물을 분리하는 크로마토그래피. 예를 들어 특이성이 높은 상호작용을 하는 2종의 분자 A, B의 한쪽을 적당한 지지체(담체라고도 불린다)에 고정화하는 것에 의해 다른 쪽의 분자에 대한 친화성 흡착제를 만들 수 있다. 지금 B를 고정화한 경우에는 이 A에 대한 친화성 흡착제를 칼럼에 충전하여 A를 함유하는 시료용액을 따라 넣으면 A만이 B의 특이적 상호작용에 의해 흡착제로부터 탈리?용출시킬 수 있다. 이 경우 지지체에 고정하여 놓은 분자를 리간드(ligand)라고 부른다. 또한 A, B 사이를 특이적 상호작용에 의한 결합은 가역적인 것이 전제가 된다.

<중 략>

일반적인 chromatography법은 수율이 매우 낮은 단점이 있으므로 재조합 단백질에 몇 개의 peptide tag이 융합된 fusion protein에 특별한 분리 정제 과정 없이 분리 정제하는 방법을 사용하고자 한다.
■융합단백질(Fusion protein) 발현시스템
: 재조합 단백질의 C-말단이나 N-말단에 특정 기능을 갖는 펩티드를 결합시켜 발현시킨 재조합 단백질을 융합단백질이라고 한다. 융합 단백질 기술을 이용함으로써, 단백질의 분리정제 과정을 간편하게 하여 효율을 높일 수 있으며, 세포 내 목적 단백질의 발현된 위치나 정도를 쉽게 확인 할 수 있으며, 용해도가 낮은 목적 단백질의 용해도를 높여서 가용성 단백질로 생산할 수 있다.
특이성 또는 친화성을 갖는 펩티드 꼬리표(tag)를 목적 단백질에 융합시켜 발현함으로써 단백질 분리 및 정제를 쉽게 할 수 있다. 분리정제를 위한 꼬리표로 주로 사용되는 것으로는 프로테인 A, 프로테인 G, 글루타티온-S-전이효소(GST), His6 등이 있다.

참고자료

· 없음