결과.Measurement of DNA concentration and purity, study about denaturation and renaturation of DNA

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험방법
4. 실험결과
5. 실험고찰
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
Measurement of DNA concentration and purity, study about denaturation and renaturation of DNA

2. 실험목적
DNA의 측정 방법을 알아보고, 온도에 따른 DNA의 Denaturation, Renaturation등의 특성 변화를 이해한다.
UV Spectrophotometer 의 작동 원리와 사용법을 익힌다.

3. 실험방법
➀DNA 농도 측정
1) spectrophotometer를 측정에 사용하기 30분 전 미리 켜 놓는다.
2) sample DNA solution을 준비한다.
3) buffer solution을 사용하여 blank 값을 설정한다.
4) 준비된 DNA solution을 cuvette에 옮기고, A260과 A280의 흡광도(Optical density value)를 측정한다. 0.01~0.5의 값이 나오면 대략 옳은 값이다.
5) A260값이 1일때, 대체로 double helix DNA 농도는 50㎍/mL이고, DNA concentration을 계산할 수 있다.

* DNA concentration(㎍/mL) = A260 Value × 50 × 희석 비율

6) 260 nm과 280 nm에서 흡광도의 비율은 DNA와 RNA의 순도를 평가하는데 사용된다. DNA 샘플의 비율이 1.8을 넘는다면, 일반적으로 ‘pure’하다고 받아들여진다. RNA 샘플의 경우 비율이 2.0을 넘으면, 일반적으로 ‘pure’하다고 받아들여진다. 만약에 비율이 위의 경우보다 낮게 나온다면, 단백질이나 페놀, 아니면 260nm파장 근처에서 잘 흡수되는 다른 오염물이 존재함한다는 의미이다.

➁ 온도 변화에 따른 DNA 특성변화
1) DNA 샘플을 준비한다. 1mL 크기의 cuvette을 사용해, A260의 값을 측정하고 적절한 농도의 DNA 샘플을 확인한다.
2) 40℃에서 90℃까지 온도를 올려가며 DNA sample이 들어있는 cuvette의 A260 흡광도를 측정한다.
3) A260 측정값의 온도에 따른 변화를 그래프로 그리고 Tm값을 계산한다.

참고자료

· 화학용어사전, 화학용어사전편찬회, 2011, 일진사
· 왓슨 분자 생물학, James D. Watson, 양재섭 역, 2010, 월드사이언스
· 생명과학대사전, 강영희, 2008, 월드사이언스
· http://blog.naver.com/applechips?Redirect=Log&logNo=60022250448
· http://www.unc.edu/~cail/biotool/oligo/