단백질 발현 (Protein expression)

소개

단백질을 발현시킨 뒤 정제하여 단백질의 발현을 확인하는 실험이다.

목차

서 론
실험 원리 및 이론
재료 및 방법
결 과
고 찰
참고 문헌

본문내용

단백질 발현 분석
단백질을 과량 발현 시켜서 단백질을 정제하기 쉽게끔 한다. 단백질 과량 발현에는 오페론 이론에서 lactose 대신에 IPTG를 넣음으로써 과량 발현 시킨다. 그 다음 단백질을 정제하는 과정에서는 GST-tag를 사용한다. 이 tag는 기질과의 강한 결합력을 보이기 때문에, 정제하고자 하는 표적 단백질에 GST를 tagging하여 단백질을 발현시킨 후에 Glutathione을 이용해 GST를 정제한 후 GST 부분만을 잘라내어 원하는 단백질을 취하는 방식으로 우리가 원하는 ROMT26단백질을 검출한다. 정제한 단백질로 단백질의 크기에 따라 분리하는 전기영동인 SDS-page를 이용하여 적절한 단백질이 발현되었는지 확인해 본다. GST의 protein size는 26.768kDa이고 ROMT26의 protein size는 27.568kDa이므로 Purified Protein size는 54.346kDa가 나와야 한다. 전기영동 결과 50kDa부근에 굵은 밴드가 보이므로 단백질 발현이 적절하게 이루어졌음을 알 수 있다.
서 론
단백질을 발현시킨 뒤 정제하여 단백질의 발현을 확인하는 실험이다. 여기서 분석하고자하는 단백질은 ROMT26이다. 이 단백질을 얻기 위해서는 과발현을 시키는데 과발현과정의 이유로는 (1)기능 및 구조 연구를 위해 다량의 단백질을 얻기 위해 (2) 원하는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위해 (3)특정 단백질을 세포 내에서 과량발현 시킬 때 세포의 생리적 현상에 미치는 영향을 관찰함으로서 그 단백질의 세포 내 기능을 추정하고자 할 때이다. 이 세가지 발현이유 중 이번 실험의 과발현 이유는 (2) 원하는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위함이다.
실험 원리 및 이론
-Theory - Protein Induction
이번 실험의 목적은 Expression of protein을 알아보기 위한 실험이다. 먼저 Protein purification을 진행하기 위해서 발현되어야 하는 Protein이 충분히 있어야 하므로 특정 Protein을 과발현 시켜야 한다. 여기서 사용되는 이론이 Protein Induction이다. 그러기 위해서 필요한 것은 Competent Cell과 Vector이다. 이번 실험에서 사용된 Vector는 pGEX란 Vector를 사용하였다.
pGEX vecor는 GST-recombinatn protein의 제작에 있어서 쓰이는 vector로, 이 벡터의 앞부분에는 GST을 coding하고 있는 sequence가 있다. 기본적으로 모든 pGEX vectors는 발현 조절 promoter로서 tau promoter가 있으며, 이 promoter는 Isopropyl B-D thiogalactoside[IPTG]에 의해 발현 유도가 된다. 게다가 모든 pGEX vector에는 tau promoter말고 내부의 lacIq gene에 의해서도 조절이

참고자료

· http://clssy.blog.me/40053273782
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_18.php
· http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm