단백질정량분석

소개

Bradford Assay, Lowry method, folin-lowry method , Ninhydrin test , Kjeldahl method , Biuret reaction, BCA정량법 (Bicinchoninic Acid Assay)

목차

1. Bradford Assay
2. Lowry method
3. folin-lowry method
4. Ninhydrin test
5. Kjeldahl method
6. Biuret reaction
7. BCA정량법 (Bicinchoninic Acid Assay)
8. UV spectrophotometry

본문내용

단백질 정량을 하는 이유는 무엇인가?
단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정으로써, 대부분의 생화학실험의 기본이 되는 과정이라고 할 수 있다. 생물학 분야의 경우 다른 분야보다 결과를 볼 때까지 뭔가 잘못되었다는 것을 알기 어려워, 준비 단계에서의 단백질 정량이 잘 못 이루어지면 헛수고를 하거나 잘못된 결과를 얻을 수 있다. 이러한 이유 때문에, 단백질 정량을 정확하게 하는 것은 매우 중요하다. 또한, 정확성뿐만 아니라, 대부분의 실험에서 반복적으로 사용하게 되므로, 간편성 역시 중요하게 여겨지기 때문에, 실험에 따라서 다양한 단백질 정량 방법이 사용되고 있다.


1. Bradford Assay

①Bradford Assay의 원리
UV-Visible spectrophometer 를 이용, 흡광도를 측정하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. Dye로는 Coomassie Blue G-250를 사용하며, 이 dye가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다.
Acidic environment reagent 조건 하에서 단백질은 Coomassie dye 에 결합하는데 이 결과로 reddish/brown form(465nm에서 최대 흡광)이던 dye는 blue form(610nm에서 최대 흡광)으로 스펙트럼 이동이 일어나게 된다. 두 가지 form의 차이는 595nm에서 최대가 되는데, 따라서 이 파장이 Coomassie dye-protein complex의 blue form을 측정하는데 최적의 파장이 된다. 575nm~615nm사이의 어느 파장에서든 blue form을 측정할 수는 있3지만 595nm에서 측정한 것보다 측정되는 흡광도 값이 10%정도 낮아지게 된다.

참고자료

· 없음