Visualization of Tie2 Phosphorylation Induced by Angiopoietin1 in Transfected Chinese Hamster Ovary Cell through Immunoprecipitation and Western Blot

소개

본 실험에서는 Angiopoietin1에 의해 유도되는 Tie2 receptor의 phosphorylation을 Tie2 receptor over expression Chinese hamster ovary cell에서 immunoprecipitation과 Western blot을 통해 확인하고자 한다.

목차

Purpose
Introduction
Material
Method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Purpose
본 실험에서는 Angiopoietin1에 의해 유도되는 Tie2 receptor의 phosphorylation을 Tie2 receptor over expression Chinese hamster ovary cell에서 immunoprecipitation과 Western blot을 통해 확인하고자 한다.

Introduction
Tie-1 receptor 및 Tie-2 receptor는 receptor tyrosine kinase의 subfamily로써 혈관내피세포에서 다량 발현되며 모세혈관의 maturation과 안정화를 촉진하여 혈관 형성에 있어 필수적인 역할을 하는 vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR)이다. Tie-2 receptor의 ligand는 vascular endothelial growth factor (VEGF)인 Angiopoietin-1 (Ang-1), Angiopoietin-2 (Ang-2)로 Ang-1의 결합에 의한 Tie-2 receptor의 phosphorylation은 생체 내 angiogenesis 과정을 촉진하고, Ang-2는 antagonist로 작용하는 것으로 알려져 있다.
실험에서 transfection에 이용된 Chinese hamster ovary (CHO) cell은 다양한 배양조건이나 유전적 변이에 대한 적응성이 높아 생명공학연구뿐 아니라 다양한 산업체에서도 많이 이용되고 있는 mammalian cell이다. Tie-2 receptor의 phosphorylation을 효과적으로 관찰하기 위해서 Tie-2 receptor의 overexpression을 유도했다. Transfection은 transformation과 infection의 합성어로 non-viral 방법을 통해서 외부 DNA를 유입하는 방법이다. 주로 mammalian cell에 대해서 transfection이라는 용어를 사용하며 bacteria의 경우 transformation이라고 한다

참고자료

· (1) Tie-1 수용체와 Tie-2 수용체간의 결합. 송현석, 김규원 (2000) 부산대학교 분자생물학과
· (2) Recombinant Protein Therapeutics from CHO Cells — 20 Years and Counting. Karthik P. Jayapal, Katie F. Wlaschin, Wei-Shou Hu (2007) Chemical Engineering Progress
· (3) Rat aorta-derived mural precursor cells express the Tie2 receptor and respond directly to stimulation by angiopoietins. Monica Iurlaro, Marta Scatena, Wen-Hui Zhu, Eric Fogel, Susan L. Wieting, and Roberto F. Nicosia (2003) Journal of Cell Science
· (4) Antigen-Antibody Interactions, Immune Assays and Experimental Systems. John M. Berestecky, Jeff S. Yokomura. (2007) University of Hawaii
· (5) Immunoglobulins-Antigen-Antibody Reactions and Selected Tests. Gene Mayer (2009) University of South Carolina
· (6) http://www.researchd.com/miscabs/angiopab.htm. RDI Division of Fitzgerald Industries Intl (2008)
· (7) http://www.korambiotech.com/sub5_2.php. Koram Biotech Corp (2004)