SDS-PAGE and preparation

소개

SDS-PAGE 준비과성, 실험절차, 그리고 결과 판독

목차

SDS-PAGE preparation
SDS-PAGE (Sodium Dodesyl Sulfate Polyacrlyamide Gel Electrophoresis)

본문내용

1. sonicator – 75% EtOH + Kimswipe로 닦기.
2. 시료를 모두 꺼낸다 (얼음을 비커에 담아서 준비)
3. E tube를 6-8 개 준비한다.
4. PBS 100㎕를 각 시료에 넣고 sonication 5번 한다.
5. maximum speed로 원심분리 2분에서 3분 정도한다.
6. 상층액만 취해서 새 tube에 옮겨 담고 시료이름/sup라고 적기
7. 남은 PELLET에는 PBS를 100㎕ 넣고 sonification 5번 한다.
8. tube에 시료명/ppt이라고 쓰고 box에 보관한다.

Sonification을 하는 이유
IPTG로 키운 E.coli 안에 우리가 필요한 protein을 가지고 있는 vector가 있다. 그 균을 파괴하기 위해서 sonification을 하는 것이다. 파괴한 후 상층액을 떠 내고 PBS를 넣는다. 그리고 가용성 단백질을 넣고 열처리를 100℃에서 5분정도 한다. 이것은 단백질의 고차구조를 일차구조로 풀어주기 위함이다. 그리고 나서는 단백질 분해효소로 Inhibition을 한다. 위와 같은 절차를 모두 마치면 SDS-PAGE를 하기위한 준비가 끝난다.

SDS-PAGE (Sodium Dodesyl Sulfate Polyacrlyamide Gel Electrophoresis)

SDS-PAGE 원리

전기영동이 DNA를 detection하는 것처럼 SDS-PAGE는 Protein 을 detection하는 tool이다.
Polyacrylamide gel에 전기를 걸어주면 왼쪽 아래에서는 빨간 전선이 양극을 띄고, 오른쪽 위에서는 검은색 전선이 음극을 띄게 되어 결국은 위는 음극, 아래는 양극이 된다. 단백질은 SDS와 결합하고 있기 때문에 전체적으로 밑으로 내려가게 되고 분자량이 작으면 작을수록 많이 내려가게 된다.

참고자료

· 없음