완충용액(buffer) 제조와 글리신 버퍼의 적정곡선

소개

DNA와 단백질 실험에 사용하는 완충용액 제조 실험 리포트 입니다.
시약의 특성과 몰수 계산하는 법, 적정 곡선 구하는 법, 등전점과의 관계 등이 있습니다.
(자세한 것은 목차 참고)

목차

1. 실험목적

2. 원리 및 이론
1) 시약의 특성
2) 적정곡선
3) 아미노산의 적정곡선
4) 등전점(pI)
5) 완충용액
6) pH, pKa, 완충제 농도와의 관계 (Henderson-Hasselbalch 식)

3. Method
1) Glycine Cl buffer의 적정
2) Tris-glycine running buffer 제조
3) TBE running buffer 제조
4) 0.1M Sodium phosphate buffer 100mL 제조

4. Result
1) Glycine Cl buffer의 적정
2) Tris-glycine running buffer 제조 (500mL)
3) TBE running buffer 제조 (1,000mL)
4) 0.1M Sodium phosphate buffer 제조 (100mL)

5. Discussion

6. Reference

본문내용

Glycine의 적정곡선에서 가장 큰 완충효과를 보이는 두 지점의 중간 지점 pH를 pKa로 간주하였다. 관찰된 pKa값은 pKa1=2.40 pKa2=9.87이고 이론값과도 일치하였다. Glycine Cl 버퍼에 염기를 첨가할 때 관찰된 pKa1 값인 2.40에 이르면 산의 절반이 소모되고, glycine의 카르복시기의 절반이 이온화되어 완충작용이 최대의 효과를 나타내게 된다. 산을 더 첨가하면 나머지 카르복시 음이온이 적정된다. 관찰된 pI 값인 5.96에서 glycine은 완전히 이온화 된 양극성 이온 형으로 존재하여 카르복시 음이온과 아미노기 양이온을 가지며 net charge는 띠지 않는다. 염기를 더 첨가하여 암모늄이온을 염기로 적정할 때는 관찰된 pKa2 값인 9.87에서 최대의 효과를 가지고 절반의 아미노기만이 양이온을 띠며 완전히 적정하게 되면 아미노기는 전하를 띠지 않게 된다. 이온화된 glycine의 농도와 그렇지 않은 glycine의 농도를 Henderson-Hasselbalch 식으로 계산할 수 있고 최대의 완충효과를 가지는 pKa 지점에서 그 비율은 1:1이다. pI 보다 작은 pH에서 glycine의 실제 전하는 양전하를 띠고 ...



5. Discussion
Glycine의 적정곡선에서 가장 큰 완충효과를 보이는 두 지점의 중간 지점 pH를 pKa로 간주하였다. 관찰된 pKa값은 pKa1=2.40 pKa2=9.87이고 이론값과도 일치하였다. Glycine Cl 버퍼에 염기를 첨가할 때 관찰된 pKa1 값인 2.40에 이르면 산의 절반이 소모되고, glycine의 카르복시기의 절반이 이온화되어 완충작용이 최대의 효과를 나타내게 된다. 산을 더 첨가하면 나머지 카르복시 음이온이 적정된다. 관찰된 pI 값인 5.96에서 glycine은 완전히 이온화 된 양극성 이온 형으로 존재하여 카르복시 음이온과 아미노기 양이온을 가지며 net charge는 띠지 않는다. 염기를 더 첨가하여 암모늄이온을 염기로 적정할 때는 관찰된 pKa2 값인 9.87에서 최대의 효과를 가지고 절반의 아미노기만이 양이온을 띠며 완전히 적정하게 되면 아미노기는 전하를 띠지 않게 된다. 이온화된 glycine의 농도와 그렇지 않은 glycine의 농도를 Henderson

참고자료

· 1. 한국생화학회, 실험생화학, pp39-43, pp171-174, 탐구당, 2004
· 2. 백형환, 윤경식, 레닌저 생화학 상, pp63-68, pp81-85, 월드사이언스, 2006
· 3. 위키피디아 http://en.wikipedia.org