Polymerase Chain Reaction 실험 레포트

소개

(역전사 효소를 이용해 얻은 새로 합성된 cDNA를) PCR을 통해 원하는 부위만 증폭시키고, 이를 agarose gel에서 전기영동 해 그 크기를 알아보는 실험의 실험 레포트입니다.
이론 조사 잘 되어 있고, 오차 원인, 분석 모두 포함되어 있습니다.

목차

Abstract
Introduction
Material & method
Result
Discussion
Reference

본문내용

Abstract

이번 실험에서는 이전 실험에서 역전사 효소를 이용해 얻은 새로 합성된 cDNA를 PCR을 통해 원하는 부위만 증폭시킨 뒤 agarose gel에서 전기영동 해 그 크기를 알아보는 과정을 수행하였다. 이를 위해 PCR tube에 주형이 될 template DNA와 원하는 부위를 합성하기 위해 미리 제조한 primer, PCR에 이용되는 Taq DNA polymerase, 실질적인 합성의 재료인 dNTP, dNTP와 결합해 효소의 substrate로 작용하는 Mg²⁺를 포함한 MgCl2를 넣어주었다. 또한 PCR 산물에서 DNA의 크기를 알아보기 위해 전기영동용 gel인 agarose gel 을 제조하고 PCR 산물을 걸어 전기영동을 수행하였다. UV 하에서 gel을 관찰한 결과 원하던 DNA band를 얻지 못하였는데, DNA 외의 다른 재료를 동일하게 첨가하고 동일한 기계를 이용한 다른 조의 실험자들이 결과를 얻은 것으로 보아 주형으로 사용한 DNA에 문제가 있었던 것으로 보인다. 전 시간에 진행했던 역전사 실험에서 충분히 고 순도의 RNA를 이용하지 않아 cDNA 합성 즉 역전사 시에 PCR에 적합하지 않은 결함이 있는 DNA가 합성되었거나 합성이 제대로 일어나지 않은 것으로 추측된다. 조교님의 실험 결과를 분석했을 때, 목적하는 DNA의 크기는 약 900bp로 확인된다.

Introduction

<Figure . PCR 과정>
제조해준 primer의 염기 서열에 따라 template DNA의 적절한 위치에 primer가 결합한다. primer 결합 후 DNA polymerase가 결합해 DNA 합성의 재료인 dNTP-Mg²⁺복합체를 이용해 새 dNA strand를 합성해 나가게 된다.

PCR 은 Polymerase Chain Reaction의 줄임말로 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법이다. 이 방법을 이용하면 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하다. 이 때, 새로운 DNA strand을 합성하는 효소인 DNA polymerase로 Taq polymerase를 사용한다. Taq polymerase는 호열 세균에서 추출된 DNA 중합효소로 생체 내의 다른 효소들과는 다르게 열에 매우 안정한 성질을 지녀 고온에서도 촉매 작용을 할 수 있기 때문이다.

참고자료

· 문서내 포함