꿀벌 미국부저병 진단 Kit 개발 (Development of Immunoassay Kits for the Detection of Paenibacillus larvae Infection in Honeybee)

서지정보

· 발행기관 : 한국양봉학회
· 수록지 정보 : Journal of Apiculture / 25권 / 2호 / 105 ~ 114페이지
· 저자명 : 강원명, 임윤규, 손성원, 윤성환, 황규계, 장원우

초록

양봉산업의 생산성을 저하시키는 미국 부저병의신속한 진단을 위하여 마우스 단클론항체를 이용한 ELISA 및 ICA법 개발연구를 수행한 바, 다음과같은 결과를 얻었다.
P. larvae의 아포항원은 AK agar에 5일간 배양하여 준비하였으며, 이 때 충분한 아포의 형성이 확인되었다. BALB/c 마우스에 면역시켜 얻은 pla03,pla06, Pla07 및 Pla26은 IgG1 type이었고, Pla23은IgG2b type이었다. 수립된 5종의 단클론항체들은 유럽부저병의 원인체인 Melissococcus pluton을 포함한 13종의 균주와 교차반응 없이 P. larvae와 높은특이도를 보였다.
ELISA 및 ICA에 적용시킬 항체 pair는 Pla06 및Pla07로 결정하였다. ICA에 적용할 colloidal gold는40nm 구경으로 개발하였으며, 전자현미경으로 확인하였을 때 비교적 고른 입자임을 확인하였다. 또한, 40nm 구경의 colloidal gold는 spectorphotometer 로 흡광 spectrum을 조사하였을 때 536nm에서 peak 를 보였다. 개발된 ELISA법의 검출한계는 105spore/ml이었으며, PCR 결과와 비교한 민감도 및 특이도는 각각 96%와 100%를 보였다. 그리고, 개발된 ICA법의 검출한계는 107spore/ml이었으며, PCR 결과와 비교한 민감도 및 특이도는 각각 92%와100%를 보였다.
결론적으로 이 연구에서 개발된 ELISA법 및 ICA 법은 꿀벌의 미국부저병의 실험실적 및 현장진단법으로 응용이 가능할 것으로 사료된다.

영어초록

American foulbrood is very hamful bacterial disease caused by Paenibacillus larvae infection in honeybee, leads great damage to bee-farming and subsequently results in critical loss of productivity in many cases. To detect the infection of Paenibacillus larvae, the ELISA and the Immuno-chromatographic assay methods were developed using specific monoclonal antibodies against Paenibacillus larvae spore. Four of the monoclonal antibodies produced were identified to be IgG1 and one to be IgG2b. No cross-reactivity of the antibodies were detected with the 13 kinds of bacteria including Melissococcus pluton which is causative agent of European Foulbrood, indicating that the monoclonal antibodies were highly specific for Paenibacillus larvae. The detection limits of Paenibacillus larvae spore were determined to be 105spore/ml, and the sensitivity and specificity were 96% and 100% respectively in ELISA. The detection limits of Paenibacillus larvae spore were determined to be 107spore/ml, and the sensitivity and specificity were 92% and 100% respectively in immunochromatographic assay. These results suggested that the ELISA and immunochromatographic assay developed in this study could be applied in diagnosis of American foulbrood.

참고자료

· 없음