대청호로부터 제작한 메타지놈 라이브러리에서 1, 2-dichloroethane의 분해에 관여하는 dhlA 유전자의 분리

서지정보

· 발행기관 : 한국수생태학회
· 수록지 정보 : 생태와 환경 / 38권 / 2호 / 137 ~ 145페이지
· 저자명 : 강철희, 문미숙, 송지숙, 이상만, 김치경

초록

전통적인 스크린 방법으로는 자연계에 존재하는 99%
이상의 미생물 자원을 확보하지 못했다. 자연생태계의 핵
산을 직접 클로닝하는 전략은 배양 가능한 미생물의 유
전적인 정보보다 더 광범위한 유전적인 정보를 전체의
미생물 메타지놈에서 확보하기 위한 계획을 세웠다. 그
결과 유용한 유전자를 탐색하는 한 방법으로 다양한 환
경에서 메타지놈 DNA 라이브러리를 구축하는 방법이었
다. 본 연구는 국내 중부권에 위치한 대청호로부터 시료
를 수집하였고, T-RFLP 방법을 사용하여 미생물 군집의
다양성을 분석하였다. 핵산의 추출은 SDS를 사용한
freeing-thawing 방법을 사용하였으며, 추출한 핵산은
UltraCleanTMkit (MoBio, USA)을 사용하여 정제하였다.
메타지놈 라이브러리는 제작은 정제한DNA와 pBACe3.6
vector를 EcoRI, BamHI, 그리고 SacII 등의 제한효소로
partial digestion하였고, 이들을 ligation한 다음
Escherichia coli DH10B에 형질전화 시켜 제작하였다. 메
타지놈 라이브러는 14 Mb 정도 확보하였는데, 평균 insert
size는 약 13~15 kb이었다. Colony hybridization으로 메
타지놈 라이브러리로부터 1, 2-dichloroethane (1, 2-
DCE) hydrolytic dehalogenation의 분해에 관련된 유전자를 확인하였다. 1, 2-DCE dehalogenas효소는 기질에대한 높은 활성을 나타내었다. 1, 2-dichloroethane dehalogenase유전자의 클론을 만들었고, 염기서열을 분석하였다. 이들 결과로 보아 대청호로부터 제작한 메타지놈에서 dhlA 유전자를 확인한 균주는 1, 2-DCE 분해에 탁월한 능력을 나타내었다.

참고자료

· 없음