생화학실험 동물 유방암 세포주로부터 RNA 추출, PCR에 의한 DNA증폭 및 전기영동

소개

"생화학실험 동물 유방암 세포주로부터 RNA 추출, PCR에 의한 DNA증폭 및 전기영동"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험원리 및 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 유의사항
6. 실험결과
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
RNA의 역할과 RNA연구의 중요성을 이해하고 동물 유방암 세포주에서 적절한 시약과 방법을 통해 RNA를 추출하여 이후 RNA를 주형으로 하여 cDNA(Complementary DNA)를 합성한 뒤, 이를 PCR로 증폭시키고 agarose gel 전기영동을 통해 증폭 결과를 확인한다.
2. 실험원리 및 이론
TRIzol™ Reagent: 페놀과 구아니디늄 이소티오시아네이트 기반 시약으로, 세포를 용해하고 RNA, DNA, 단백질을 분리한다.
chloroform 처리: 상층에는 RNA, 하층에는 DNA 및 단백질이 분리되도록 한다. isopropanol 침전: RNA를 침전시켜 고농도로 분리한다.
ethanol 세척: RNA에서 염과 불순물을 제거하여 순도를 높인다.
RNA는 DNA와 함께 유전정보를 전달하고 생물체 내에서 단백질 합성에 관여하는 분자로 DNA와 달리 단일가닥이고 mRNA, tRNA, rRNA등으로 분류된다. mRNA는 DNA의 상보적 유전정보(codon)를 가지며 이 정보는 폴리펩티드로 번역된다. tRNA는 단백질 번역과정에서 mRNA의 코돈과 아미노산 사이의 연결자(adaptor)로 작용한다, rRNA는 단백질과 결합하여 리보솜을 형성해 단백질 합성에 관여한다.
RNA는 세포분열, 분화 및 성장과 세포노화 및 사망에 이르기까지 세포 전 생에 조절에 중요한 역할을 하며, 특정 RNA의 결함이나 조절은 심장병, 일부 암, 뇌졸중 및 기타 여러가지의 질병과 관련이 있다. 바이러스를 매개하는 임상질병 중 대부분의 바이러스는 RNA를 통해 유전정보를 운반하므로 RNA분리는 연구 활용에 있어 매우 중요하다.
뉴클레오타이드(당+염기+인산)를 구성하는 5탄당의 종류가 ribose인 것이 RNA이며 이를 구성하는 염기는 adenine, guanine, cytosine, uracil 4개이다.

참고자료

· David L. Nelson/Michael M. Cox/대표역자 윤경식, 2023, 레닌저 생화학, 월드사이언스, p314-315
· Trizol reagent user guide, thermofisher.com (생화학실험 매뉴얼 참고용)
· RNA구조, https://m.blog.naver.com/sml-meditree/221722169513, 2024.11.17
· RNA추출과정 , https://merry.more-merrier.co.kr/15, 2024.11.17
· Trizol reagent, https://www.abpbio.com/wp-content/uploads/2020/06/msds-TRIzol-Reagent.pdf, 2024.11.17
· Ethanol, https://www.ehtis.or.kr/cmn/chemistory/material/comsenDetail.do, 2024.11.17
· TRIzol™ Reagent의 MSDS,
· https://www.abpbio.com/wp-content/uploads/2020/06/msds-TRIzol-Reagent.pdf,
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· https://www.skchemicals.com/download/MSDS/CnR/%ED%81%B4%EB%A1%9C%EB%A1%9C%ED%8F%AC%EB%A6%84.pdf,
· Isopropanol의 MSDS
· https://www.skchemicals.com/download/MSDS/CnR/MSDS_CnR_ISOPROPYL_ALCOHOL.pdf,
· 75% ethanol의 MSDS
· https://m.eqscience.co.kr/exec/front/Board/download/?no=456&realname=2022/05/04/7f6ac5aded0e5b0f
· 7a4d1bbbc07d5831.pdf&filename=%EC%97%90%ED%83%84%EC%98%AC+70%(%EC%86%8C%EB%8F%8
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· 생화학실험 매뉴얼-PCR에 의한 DNA증폭 및 전기영동
· PCR 기초, https://takara.co.kr/web01/studio/bookcase.asp?Stid=Book003, 2024.12.01
· 차대룡, 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용한 연구기법, 대학신장학외지 제 19권 부록 제 1호, 2000
· PCR 유의사항, https://partrita.github.io/posts/PCR/, 2024.12.01
· ‘Horizontal vs. Vertical Gel Electrophoresis Systems’ 검색,
· https://www.laboratory-equipment.com/blog/horizontal-vs-vertical-gel-electrophoresissystems?srsltid=AfmBOopCz30zZXqhhqpJTbwji8VJaMIN90igipJaCw0IY_RcXi9lxTzL, 2024.12.14