[이화여대 생명과학실험3 분반1등 A+ 레포트] Cell Proliferation Analysis by MTT Assay

소개

이화여자대학교 생명과학실험3 과목 A+ 레포트입니다.
정성 들여 작성했습니다. 참고하시어 좋은 결과 있으시길 바랍니다.

목차

I. 실험 목표

II. Introduction
1. MTT Assay
① MTT Assay의 원리 및 장단점
② MTT Assay의 응용 가능한 분야
2. 실험에 사용된 각 시약의 역할
① Trypsin-EDTA Solution
② 0.4% Trypan Blue
③ MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)
④ 50% Ethanol + 50% DMSO

III. Materials & Method
1. 실험 도구 및 재료(Materials)
2. 실험 과정(Method)

IV. Results
1. Cell Counting
① Cell Density 및 Cell Viability
② 1×104cells/well을 분주하기 위해 하나의 well에 필요한 세포 현탁액의 volume
2. MTT assay
① Table and Graph of Assay
② 결과 해석

V. Discussion

VI. References

본문내용

I. 실험 목표
MTT assay는 세포의 증식능을 분석하는 실험 기법으로, 세포의 대사에 관여하는 미토콘드리아 내 NADH-dependent cellular oxidoreductase enzyme을 통해 MTT가 formazan으로 환원되는 원리를 이 용한다. 해당 실험은 배양한 세포 수를 직접 계산한 뒤, 세포의 수(1×104cells/well, 2×104cells/well)를 변수로 하여 MTT assay를 통해 각 condition 별 세포의 대사 활성이 어느 정도로 측정되는지 도출하 고, 이의 원리에 대해 이해하는 것을 목표로 한다.

II. Introduction
1. MTT Assay
① MTT Assay의 원리 및 장단점
MTT assay는 세포 대사 활성 관찰을 통해 세포의 생존율 및 세포 증식 등을 측정하는 실험 기 법이다. 세포 내 소기관 중 하나인 미토콘드리아(mitochondria)는 세포의 대사 활성에 관여한다. 따 라서 미토콘드리아 활성 측정을 통해 세포의 대사 활성을 분석할 수 있다.
MTT assay는 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)라는 물질을 이용 하여 진행된다. 세포에 MTT 시약을 첨가할 경우, MTT는 미토콘드리아의 내부로 들어오게 된다. 미토콘 드리아의 은 내부에는 electron NADH-dependent donor로 이용하여 cellular MTT를 oxidoreductase enzyme 또한 존재하는데, 이 enzyme NADH를 formazan으로 환원한다. Formazan은 자주색을 띠는 비수용성 물질로, DMSO(dimethyl sulfoxide) 등의 유기 용매에 용해될 수 있다.

참고자료

· 검색어 「MTT assay」, 『Merck』, https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/cell-counting-and-health-analysis/cell-proliferation-kit-i-mtt, 접속일 2024.06.10.
· [2] L. Gutiárrez, G. Stepien, L. Gutiérrez, M. Pérez-Hernández, J. Pardo, J. Pardo, V. Grazú, J.M. de la Fuente,1.09 - Nanotechnology in Drug Discovery and Development, Editor(s): Samuel Chackalamannil, David Rotella, Simon E. Ward, Comprehensive Medicinal Chemistry III, Elsevier, 2017, Pages 264-295, ISBN *************,
· https://doi.org/10.1016/B978-0-12-409547-2.12292-9.(https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B978*************929)