Enzyme Activity- Colorimetric of Catalase

소개

"Enzyme Activity- Colorimetric of Catalase"에 대한 내용입니다.

목차

I. Introduction
1. Enzyme
2. Catalase
3. 흡광, 형광, 발광의 원리
4. 표준 검정 곡선법 (standard calibration curve methods)
5. 실험 원리 : 남은 h2o2양을 감별하여 catalase농도 인지 / 줌크로산염+아세트산 -> cromatic acid
6. Dichromate/Acetic acid (D/A)

II. Materials

III. Method

IV. Result

V. Discussion
1. 0.6unit과 0.8unit의 결과가 바뀐 듯한 양상을 보임
2. sample 1, 2 끼리 유의미한 차이가 없음
3. 시약 계산 원리
4. 실험 중 주의 사항

본문내용

1. Enzyme

효소(enzyme)란 생체 내의 화학반응을 매개하는 단백질 촉매이다. 효소와 결합하는 특이적 반응물을 기질(substrate)이라고 하고 기질과 반응하여 활성화 에너지를 낮춰 반응을 촉진 시킨다. 기질의 입체구조와 효소의 활성부위가 맞아야 결합하여 반응이 일어나고 이를 기질특이성을 가졌다고 한다. 효소는 결국 단백질이므로 3차구조에 중요한 온도, pH 등 환경 조선이 활성 정도에 영향을 미친다.

촉매 작용에는 총 네가지 정도의 방법이 있는데 다음과 같다.
1) 특이적 산-염기 촉매 작용 : 물속에 존재하는 H+또는 OH-이온만을 사용하는 촉매
2) 일반적 산-염기 촉매 작용 : 다른 분자가 양성자 전이에 관여하여 작용
3) 공유결합성 촉매 작용 : 효소와 기질 사이 일시적인 공유 결합이 형성
4) 금속이온 촉매 작용 : 효소에 결합된 금속과 기질 간 이온의 상호작용을 일으킴

2. Catalase

카탈레이스는 O2 대사 동안 생성된 과산화수소에 의한 산화적 손상으로부터 세포를 보호하는 금속 효소이다. 과산화수소를 물과 산소로 분해함으로써 세포를 보호한다. 몸 속에 있는 H2O2는 체내에 있는 다른 금속 이온과 반응하여 hydroxyl radical을 만들 수 있다. hydroxyl radical은 반응성이 매우 커서 체내에서 순간적으로 반응할 수 있다. 이는 안정된 세포를 손상시킬 수 있기에 과산화수소를 체내에서 제거하는 것은 매우 중요하다고 볼 수 있다.

3. 흡광, 형광, 발광의 원리
1) 흡광(absorbance)

흡광은 샘플에 의해 흡수된 빛의 세기를 측정하는 방법이다. 화학물질은 각각 고유의 값으로 잘 흡수하는 파장이 있다. 따라서 흡수된 빛의 세기를 측정한 다음 이를 통해 어떤 화합물이 많은지 측정할 수 있다.

2) 형광(fluorescence)
물질이 빛의 자극에 의하여 에너지 준위가 올라갔다가 다시 고유의 에너지 상태로 돌아가기 위해 빛을 발산하는 현상을 말한다.

참고자료

· 96 well plate 이미지 : https://commons.wikimedia.org/wiki/File:96-Well_plate.svg
· https://www.expii.com/t/temperature-enzyme-reaction-rates-effects-examples-10057 / 그림 14
· EFFECT OF TEMPERATURE ON CATALASE ACTIVITY/ H. C. EYSTER/ The Charles F. Kettering Foundation,/ Yellow Springs, Ohio
· https://www.vernier.com/vernier-ideas/enzyme-action-temperature-of-denaturation/
· 레닌저 생화학 6판 189~210쪽
· Current Opinion in Chemical Biology, 2002 ,Volume 6, Issue 2, 1 April 2002, Pages 227-235
· RETURN TO ISSUEPREVREVIEWNEXT ADDITION / CORRECTIONThis article has been corrected. View the notice. Environmental Implications of Hydroxyl Radicals (•OH) / Sasho Gligorovski*†, Rafal Strekowski†, Stephane Barbati†, and Davide Vione
· https://www.sciencephoto.com/media/659646/view/action-of-catalase-on-hydrogen-peroxide
· https://www.ossila.com/en-kr/pages/absorbance-spectroscopy
· https://www.wpiinc.com/blog/post/absorbance-detection / absorbance 검색
· 네이버 지식백과, 화학백과, 발광 검색 (2023.06.02.
· https://www.jove.com/kr/v/10188/calibration-curves /표준검정 곡선법 검색
· https://www.assaygenie.kr/elisa-assay-principle-protocols-methods-kits-kr
· / elisa기기원리, 희석 사진, positive/negative control