서강대 현대생물학실험1 항체생산

소개

서강대 현대생물학실험1 "항체생산"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Intro
3. Materials and Methods
4. Data and Result
5. Discussion
6. References

본문내용

1. Abstract

본 실험은 목적 protein인 Green Fluorescent Protein (GFP)를 immunoblotting으로 검출해 내기 위하여 mouse에 항원을 주입해 얻은 항체와 AP 처리된 2차 항체를 사용해서 결과를 확인하고 그 원리를 이해하기 위한 실험이다. 본 실험에서 사용한 실험 동물은 Mus musculus이고 복강 주사로 항원을 주입하였다. 총 3번에 걸쳐 항원에 노출시켜서 2차 면역 반응을 유발하고 gas 안락사 후에 심장 채혈로 혈액 추출 후에 혈청을 얻었다. SDS-PAGE로 분리해낸 농도별 GFP sample들 중 하나는 Coomasssie blue로 염색하고 나머지는 gel에서 membrane으로 단백질을 transfer하고 1차, 2차 항체를 처리햤다. 그 후 2차 항체의 AP에 반응하는 BCIP/NBT를 넣어서 보라색의 발색이 나타나는 것을 확인했다. 실험 결과 Coomassie blue 염색한 band는 약 26.9 kDa 부근에서 나타났고 GFP 농도가 높을수록 진한색의 두꺼운 band가 나타났다. immunoblotting의 결과도 마찬가지로 band가 26.9 kDa 부근에서 나타나고 농도가 높을수록 더 진한 보라색의 band가 두껍게 나타남을 확인할 수 있다. 이를 통해서 GFP sample이 모두 1차, 2차 항체와 특이적인 결합을 올바르게 한 것을 확인할 수 있었다.

2. Intro

항원은 non-self로 인식돼 후천적인 면역반응을 일으키는 물질이다. 항원의 예로는 병원체, 이물질, 또는 다른 종이 장기 조직 등이 있다. 항원이 우리 몸에 침입하게 되며 그 특정 항원에 대해서 대항하는 물질이 만들어지는데 이를 항체라고 한다. 항체는 B 림프구의 표면에 존재하는 Immunoglobulin (Ig)이 항원 수용체로서 항원을 인식하게 되고 그 안에서 해당 항원에 대한 항체가 만들어지게 된다, 그 후에 세포의 밖으로 분비되고 특정한 항원에 결합해서 그 항원의 병원성을 중화하거나 항원을 소멸시키는 일에 도움이 된다. 즉, 항체는 항원과 결합할 때 특이적으로 결합하기 때문에 항원-항체 반응의 특이성을 갖는다고 한다. 특이적인 면역은 B 림프구와 T 림프구가 관여한다. B 림프구와 T 림프구는 표면에 특정한 항원을 인식하는 수용체를 지니고 있다.

참고자료

· Campbell, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky & Reece(2020), 캠벨 생명과학, 11th ed, 바이오사이언스출판, pp. 366-369, pp.1072-1077
· Dickie, M. M., (1975). “In Biology of the Laboratory Mouse”. Green EL. (Ed). Dover Publications. New York, p. 25.
· Congdon, R. W., Muth, G. W., & Splittgerber, A. G., (1993). “The Binding Interaction of Coomassie Blue with Proteins”. Analytical Biochemistry, Volume 213, Issue 2, pp. 407-413.