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RT-reaction & qPCR을 이용한 p21 단백질 발현 분석2025.11.171. 역전사 반응(RT-reaction)과 cDNA 합성 역전사효소는 RNA를 주형으로 하여 DNA를 합성하는 효소이며, 결과물인 cDNA는 mRNA의 상보적 DNA이다. cDNA는 전사 가능한 엑손 영역만 포함하고 인트론이 제거되어 있어 genomic DNA와 다르다. RT-reaction에서는 Random Hexamer, dNTPs, RNase inhibitor, Reverse transcriptase 등을 사용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성한다. 이 기술은 cDNA 라이브러리 제작과 RT-PCR 등 분자생물학의 핵심 기술에...2025.11.17
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RNA 분리 및 cDNA 합성, 실시간 PCR을 이용한 개화시기 측정2025.11.121. RNA 분리 (RNA Isolation) 생명과학 실험에서 세포나 조직으로부터 RNA를 추출하는 기본적인 분자생물학 기법입니다. 이 과정은 세포를 용해시키고 단백질과 DNA를 제거하여 순수한 RNA를 얻는 것을 목표로 합니다. 추출된 RNA는 이후 역전사 반응이나 유전자 발현 분석 등 다양한 실험의 기초 재료로 사용됩니다. 2. cDNA 합성 (cDNA Construction) mRNA를 주형으로 하여 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용해 상보적 DNA(complementary DNA)를 합성하는 과정입...2025.11.12
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DNA sensitivity test2025.01.181. DNA 구조와 기능 DNA는 유전 정보를 저장하는 분자로서 2개의 polymer strand가 double helix 구조를 이루며 4가지 염기가 상보적으로 결합한다. 다양한 요인에 의해 double strand 구조가 깨질 수 있으며, DNA repair system에 의해 복구되지만 심각할 경우 세포가 죽기도 한다. 2. DNA 손상 유발 물질 MMS(Methyl methanesulfonate)는 DNA adduct를 형성하여 DNA polymerase의 복제를 어렵게 하고 double strand break를 유발한다. ...2025.01.18
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RT-PCR 실험 레포트: 원리, 방법 및 결과 분석2025.11.171. PCR(중합효소 연쇄반응)의 원리 및 역사 PCR은 소량의 시료로 DNA를 증폭시켜 대량의 표적 유전 정보를 얻는 방법으로, 1985년 캐리 멀리스에 의해 개발되었다. DNA의 특정 부분을 복제·증폭시키는 기법으로 변성, 결합, 신장의 3단계로 진행되며, 지정 영역의 DNA를 2ⁿ배만큼 증폭시킨다. 현재 생명과학 분야에서 필수적으로 이용되며, 코로나-19 검출 등 다양한 분야에 활용되고 있다. 2. RT-PCR의 종류 및 특징 RT-PCR은 RNA 바이러스 검출을 위해 역전사 반응을 시행하는 방법으로, 1-step RT-PCR...2025.11.17
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Agarose Gel Electrophoresis 결과 분석2025.11.131. Agarose Gel Electrophoresis Agarose gel electrophoresis는 DNA, RNA, 단백질 등의 생물학적 분자를 크기에 따라 분리하는 기본적인 실험 기법입니다. 전기장을 이용하여 음전하를 띤 핵산 분자들을 agarose 젤을 통해 이동시켜 분자의 크기별로 분리합니다. 이 방법은 분자생물학, 유전학, 생화학 연구에서 DNA 단편 분석, PCR 산물 확인, 플라스미드 검증 등 다양한 목적으로 널리 사용됩니다. 2. DNA 분자 분리 Agarose gel electrophoresis를 통해 DNA...2025.11.13
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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 변성, 결합, 신장 과정을 반복하여 DNA를 증폭시킨다. 2. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) RT-PCR은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현...2025.01.18
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생물공정실험 결과보고서 - Gene Expression Analysis by RT-PCR2025.01.041. Reverse Transcription PCR (RT-PCR) 이 실험의 목적은 reverse transcription PCR을 통해 얻은 cDNA 샘플을 real-time PCR로 증폭시키는 것입니다. 다양한 시약을 사용하여 cancer cell과 ADSC cell의 유전자 발현, 특히 housekeeping gene인 GAPDH와 target gene인 Thy-1의 발현 차이를 분석하고자 합니다. 2. Real-time PCR 분석 실험 결과를 통해 ΔCt 값을 계산하여 각 세포주에서 target gene인 Thy-1이 h...2025.01.04
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방사선 조사 및 자외선이 DNA에 미치는 영향2025.11.131. 자외선(UV Radiation)과 Thymine Dimer 메커니즘 자외선은 200-280nm의 파장을 가진 강한 에너지의 전자기파로, 미생물 살균에 사용된다. UV-A, UV-B, UV-C, 진공자외선 등 4가지 종류가 있으며, 특히 UV-C(200-280nm)의 253.7nm 파장이 살균 전용 파장이다. 자외선이 DNA에 조사되면 인접한 두 개의 Pyrimidine 염기(thymine, cytosine) 사이에 공유결합이 형성되어 thymine dimer가 생긴다. 이는 DNA의 RNA 주형가닥 역할을 방해하고 복제 시 오...2025.11.13
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유전자와 유전자 활성 연구를 위한 분자도구2025.01.181. 서던블롯 서던블롯은 특정 DNA 절편을 동정하는 데 사용되는 기술입니다. 이 방법은 genomic DNA를 제한효소로 자른 후 아가로스 겔 전기영동을 통해 크기별로 분리합니다. 그리고 DNA를 변성시켜 nitrocellulose 또는 nylon 멤브레인으로 이동시킵니다. 이렇게 이동된 DNA는 방사선 동위원소나 비방사선 물질로 표지된 DNA 또는 RNA 탐침과 하이브리다이제이션되어 자기방사법 등을 통해 검출됩니다. 이 기술은 genomic DNA뿐만 아니라 plasmid, cosmid, bacteriophage 등의 분석에도 ...2025.01.18
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