총 43개
-
Gene cloning 기술의 원리와 응용2025.11.141. Gene cloning의 정의 및 개념 Gene cloning은 생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출하여 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 DNA 재조합 기술이다. 유전자 클론화라고도 불리며 특정 유전자의 대량 복제를 위해 사용되는 중요한 생명공학 기술이다. 이 기술은 분자생물학과 세포생물학 연구에서 각 유전자의 생물학적 기능을 이해하기 위해 필수적이다. 2. Gene cloning의 응용 분야 Gene cloning은 다양한 종의 유전체와 종간 유전적 다양성 연...2025.11.14
-
아가로스겔 전기영동을 이용한 플라스미드 클로닝 확인2025.11.151. 아가로스겔 전기영동 Restriction digestion 및 uncut plasmid를 통해 클로닝 여부를 확인하는 실험 방법입니다. 아가로스겔을 이용하여 DNA 샘플을 전기영동으로 분리하고, band shift 및 insert 유무를 관찰하여 클로닝 성공 여부를 판단합니다. 1X TAE buffer에 아가로스를 녹여 겔을 만들고, EtBr을 첨가한 후 DNA 샘플을 로딩하여 110V에서 전기영동을 수행합니다. 2. 플라스미드 클로닝 검증 Restriction digestion으로 처리된 DNA와 uncut plasmid를 ...2025.11.15
-
제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 분석2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 주로 세균이 보유한 DNA 절단 효소로, 외부 바이러스의 DNA를 절단하여 자기 보호 기능을 한다. 종류에 따라 4개 또는 6개의 염기서열을 인식하여 비점착성 또는 점착성 말단을 생성한다. 같은 효소로 절단된 부위는 동일한 끝을 가지므로, 표적DNA와 플라스미드를 같은 제한효소로 자르고 ligase로 결합시켜 재조합 DNA를 만들 수 있다. DNA 클로닝 등 분자생물학 연구에 광범위하게 사용된다. 2. 전기영동(Electrophoresis) 전기장의 영향으로 전하를 띤 물...2025.11.17
-
플라스미드 DNA 추출 및 분석 실험 보고서2025.11.171. 플라스미드 플라스미드는 세균의 세포 내에 복제되어 독자적으로 증식할 수 있는 염색체 이외의 DNA 분자이다. 세균의 생존에 필수적이지는 않으며 비교적 크기가 작고 세포 상호간에 전달이 잘 된다. 복제 원점을 가지고 있어 복제가 가능하며 유전자가 있다면 정상적으로 발현된다. 접합 과정이나 직접 세포막을 통해 다른 세균에게 전달될 수 있어 세균의 유전적 다양성을 높여준다. 2. 플라스미드 추출 원리 플라스미드 추출은 플라스미드를 제외한 세균의 다른 부분을 제거하는 것으로, 특히 플라스미드와 염색체 DNA를 분리하는 것이 중요하다....2025.11.17
-
DNA 연결 및 형질전환, 플라스미드 추출 및 제한효소 절단2025.11.171. T4 DNA Ligase와 DNA 연결(Ligation) T4 DNA ligase는 T4 박테리오파지에서 유래한 효소로, DNA의 3'-OH와 5'-P 사이에 phosphodiester 결합을 형성하여 DNA를 연결한다. Ligation buffer에는 Tris-HCl(pH 7.6), MgCl2, DTT, ATP가 포함되며, 각각 완충작용, cofactor 제공, 환원환경 조성, cofactor 제공의 역할을 한다. Self-ligation 방지를 위해 double-digestion(서로 다른 제한효소 사용) 또는 alkali...2025.11.17
-
TA cloning, Mini prep, Enzyme cut 실험2025.11.171. TA Cloning TA cloning은 PCR 산물의 3'-A overhang과 T vector의 3'-T overhang 사이의 상보적 결합을 이용하는 클로닝 방식입니다. T4 DNA ligase를 사용하여 phosphodiester bond를 형성하고 ligation을 진행합니다. 본 실험에서는 insert DNA와 vector의 molar ratio를 1:3으로 설정하여 충분한 ligation이 일어나도록 했습니다. LacZ selection을 통해 transformation 성공 여부를 확인하며, white colon...2025.11.17
-
DNA 기술을 이용한 형질전환 및 PCR 실험2025.11.171. DNA 클로닝 및 형질전환(Transformation) DNA 클로닝은 DNA를 재조합하고 숙주 안에서 복제하는 과정이다. 대장균 형질전환을 위해 competent cell을 준비하고 플라스미드를 도입한 후 열충격(heat shock)을 가한다. X-gal/IPTG가 포함된 고체배지에서 배양하면 형질전환된 세포는 흰색 colony를, 형질전환되지 않은 세포는 파란색 colony를 형성한다. 이는 LacZ 유전자의 발현 여부에 따른 결과로, 외부 DNA가 삽입되면 LacZ 발현이 억제되어 β-galactosidase가 생성되지 ...2025.11.17
-
형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
-
제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA를 특정 염기서열에서 절단하는 효소로, 클로닝 벡터와 삽입 DNA의 적절한 제한효소 부위 결정이 중요합니다. 각 제한효소는 서로 다른 특성을 지니며 최적온도(25℃~64℃)와 최적 완충용액 상태에서 절단반응을 수행해야 합니다. 활성단위 1U는 특정 제한효소 자리를 가진 1μg DNA를 1시간 내에 절단할 수 있는 효소의 양입니다. Type I, II, III으로 구분되며, 실험실에서는 주로 특이성이 높은 Type II를 사용합니다. 2. DNA 절단 말단(Sticky...2025.11.17
-
제한효소를 이용한 플라스미드 절단 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 서열을 인식하여 절단하는 효소이다. 본 실험에서는 Hind III과 Xbal 두 가지 제한효소를 사용하여 플라스미드를 절단했다. 37℃에서 1시간 반응시켜 플라스미드를 특정 위치에서 절단하는 원리를 이해하고, 절단 반응에서 버퍼, 효소 농도, 반응 시간 등의 조건을 고려하는 것이 중요함을 학습했다. 2. 전기영동(Gel Electrophoresis) DNA 분자를 크기에 따라 분리하는 기법으로, 0.8X agarose gel을 사용하여 절단된 플라스미드를 분석...2025.11.17
4 / 5
