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제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 실험2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA를 특정 염기서열에서 절단하는 효소로, 클로닝 벡터와 삽입 DNA의 적절한 제한효소 부위 결정이 중요합니다. 각 제한효소는 서로 다른 특성을 지니며 최적온도(25℃~64℃)와 최적 완충용액 상태에서 절단반응을 수행해야 합니다. 활성단위 1U는 특정 제한효소 자리를 가진 1μg DNA를 1시간 내에 절단할 수 있는 효소의 양입니다. Type I, II, III으로 구분되며, 실험실에서는 주로 특이성이 높은 Type II를 사용합니다. 2. DNA 절단 말단(Sticky...2025.11.17
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일반생물학실험 REPORT_Plasmid mini-prep2025.05.101. 플라스미드 플라스미드는 세균을 비롯해 많은 생물들이 염색체 외에 추가로 갖고 있는 DNA 조각으로 크기가 상대적으로 작고 스스로 복제할 수 있는 능력이 있어 클로닝할 때 유용한 벡터로 활용되고 있다. 숙주의 성장과 생식과정에 필수적이지는 않지만 종류에 따라 항생물질 등에 대한 저항성 유전자, 접합에 관여하는 유전자, 새로운 대사를 가능하게 하는 유전자들을 가지고 있어 숙주세포에 선택적 이점을 갖게 해주기도 한다. 2. 제한 효소 제한 효소 또는 제한 내부핵산 가수분해 효소는 이중 가닥 DNA 분자의 특정한 염기서열을 인식하여 ...2025.05.10
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DNA 구조의 이해 & DNA 추출2025.05.111. DNA 구조 DNA는 디옥시리보뉴클레오티드로 이루어진 고분자 중합체로, 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재할 수 있다. 세포를 가진 생물의 DNA는 모두 이중가닥 형태를 가진다. DNA 염기의 구조와 왓슨-클릭 염기쌍의 수소결합 패턴을 이해할 수 있다. 2. 플라스미드 플라스미드는 원핵생물의 염색체 DNA 이외의 자가복제능력을 가지는 DNA환상 분자로, 숙주인 세균에 유전적 다양성을 증가시킬 수 있다. R인자라 불리는 플라스미드는 숙주세포가 항생물질과 독성물질에 저항성을 갖도록 한다. 3. 콜리신 많은 세균균주는 플라스미드에 ...2025.05.11
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플라스미드 DNA 준비 및 제한효소 지도 작성2025.11.121. 플라스미드 DNA 준비 플라스미드는 박테리아 세포에서 발견되는 작은 원형 DNA 분자로, 유전자 공학 실험에서 중요한 벡터로 사용됩니다. 플라스미드 DNA 준비 과정은 박테리아 배양, 세포 용해, DNA 추출 및 정제 단계를 포함하며, 순수한 플라스미드 DNA를 얻기 위해 여러 정제 기법이 적용됩니다. 이 과정을 통해 얻은 플라스미드는 분자생물학 연구와 유전자 클로닝에 필수적인 재료입니다. 2. 제한효소 지도 작성 제한효소 지도(Restriction map)는 DNA 분자 위에서 특정 제한효소의 인식 부위와 절단 위치를 나타내...2025.11.12
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제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 분석 및 전기영동2025.11.121. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA의 특정한 부위를 인식하여 phosphodiester bond를 절단하는 효소이다. 본 실험에서 사용된 HindIII 효소는 DNA상에서 T와 C 사이의 결합을 끊어 원형의 플라스미드 DNA를 선형 형태로 변환한다. 제한효소의 특이성에 따라 DNA의 특정 사이트를 찾아 절단하며, 이를 통해 제한효소 지도를 작성할 수 있다. 2. 아가로스 겔 전기영동(Agarose Gel Electrophoresis) DNA 조각을 분리하고 인식하는 가장 일반적인 방법으로, 간단하고 ...2025.11.12
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박테리아 세포로부터 플라스미드 정제2025.11.131. 플라스미드 정제 박테리아 세포로부터 플라스미드를 분리하고 정제하는 과정으로, 세포 용해, 단백질 제거, DNA 침전 등의 단계를 포함합니다. 플라스미드는 박테리아에서 자연적으로 발견되는 작은 원형 DNA 분자로, 유전자 공학 및 생명공학 연구에 광범위하게 사용됩니다. 2. 박테리아 세포 배양 플라스미드 정제를 위한 전제 조건으로, 플라스미드를 함유한 박테리아 세포를 배양하여 충분한 양의 세포를 확보하는 과정입니다. 일반적으로 LB 배지에서 배양되며, 항생제 선택 마커를 사용하여 플라스미드 보유 세포만을 선별합니다. 3. DNA...2025.11.13
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박테리아 세포로부터 플라스미드 정제 결과2025.11.131. 플라스미드 정제 박테리아 세포로부터 플라스미드를 분리하고 정제하는 과정입니다. 플라스미드는 박테리아에서 염색체 외에 존재하는 작은 원형 DNA 분자로, 유전자 공학 및 생명공학 연구에서 중요한 도구로 사용됩니다. 정제 과정에는 세포 용해, 단백질 제거, DNA 추출 및 정제 단계가 포함되며, 최종적으로 순수한 플라스미드 DNA를 얻을 수 있습니다. 2. 박테리아 세포 배양 플라스미드 정제를 위해 박테리아 세포를 배양하는 단계입니다. 박테리아는 플라스미드를 포함하고 있으며, 충분한 양의 플라스미드를 얻기 위해 적절한 배양 조건에...2025.11.13
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대장균 형질전환을 위한 Competent Cell 제조2025.11.141. Competent Cell 제조 낮은 온도에서 세포막 인지질의 유동성을 감소시키고, 염화칼슘으로 세포막의 음전하를 감소시켜 competent cell을 제조한다. 제조된 competent cell은 글리세롤에 현탁시켜 cell stock으로 보관된다. Competent cell은 외부 DNA 삽입이 용이하도록 화학적으로 처리된 대장균 세포로, 형질전환에 필요한 수용성 세포이다. 2. 형질전환 및 대장균 사용 이유 형질전환은 외부 DNA를 세포 내에 삽입하여 세포의 형질을 변환시키는 유전자 재조합 방법이다. 대장균을 사용하는 이...2025.11.14
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DNA 형질전환 실험 결과 및 분석2025.11.141. 형질전환(Transformation) 형질전환은 원래 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 유전자가 있는 DNA 사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합하여 세포의 유전형질이 변화되는 분자생물학적 현상이다. 본 실험에서는 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환을 수행하고, ampicillin과 X-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시켰다. 2. 재조합 DNA 선별 방법 클로닝된 DNA 조각이 벡터에 성공적으로 삽입되었는지 확...2025.11.14
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Colony PCR 실험 결과 및 분석 보고서2025.11.141. Colony PCR 원리 및 방법 Colony PCR은 DNA 추출이나 플라스미드 정제 없이 세균 colony에서 직접 원하는 insert를 포함하는 플라스미드를 선별하는 방법이다. 미생물 colony를 template로 사용하여 비용 절감과 시간 단축의 장점이 있으나, 목적 DNA의 돌연변이를 탐지할 수 없어 거짓 양성 결과 확률이 높다는 단점이 있다. 2. PCR 실험 오차 원인 및 개선 방안 실험 오차는 클린 벤치 미사용으로 인한 오염, 이쑤시개 재사용으로 인한 colony 오염, 피펫팅 과정의 거품 발생으로 인한 DNA...2025.11.14
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