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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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연세대학교 생화학실험(1) 6주차 Peptide Mass Fingerprinting In-gel Digestion2025.05.041. Peptide Mass Fingerprinting (PMF) Peptide Mass Fingerprinting (PMF)은 단백질 동정을 위한 기술로, 단백질을 효소로 절단하여 생성된 펩타이드의 질량을 측정하고 데이터베이스와 비교하여 단백질을 식별하는 방법입니다. 이 기술은 SDS-PAGE를 통해 분리된 단백질 밴드에서 시작되며, 밴드를 절단하고 효소로 소화하여 생성된 펩타이드의 질량을 질량분석기로 측정합니다. 이렇게 얻은 펩타이드 질량 데이터를 데이터베이스와 비교하여 단백질을 동정하게 됩니다. 2. In-gel Digesti...2025.05.04
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 7주차 Peptide Mass Finger-Printing2025.05.041. MALDI-TOF 질량분석법 MALDI-TOF 질량분석법은 고분자 물질에 대해 시료의 분해 없이 기화/이온화가 가능한 방법으로, 일반적으로 질량이 크고 열에 불안정한 생체 고분자나 합성 고분자에 이상적으로 적용할 수 있다. 이 실험에서는 MALDI 이온화 장치와 TOF 질량 분석기를 이용하여 단백질을 동정하는 방법을 공부한다. 2. 단백질 동정 MALDI-TOF 질량분석법을 이용하여 단백질을 동정하는 과정을 설명한다. 시료를 MALDI 장치에 주입하고 질량 분석기로 분석한 후, 결과 스펙트럼을 데이터 검색 엔진에 입력하여 단백...2025.05.04
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[A+] 연세대학교 생화학실험(2) 3주차 Plasmid and Plasmid DNA preparation2025.05.121. Plasmid and Plasmid DNA preparation 이 자료는 플라스미드와 플라스미드 DNA 준비에 대한 내용을 다루고 있습니다. 플라스미드는 세포 염색체와는 별도로 존재하는 자기 복제 DNA 분자로, 다양한 클로닝 사이트를 가지고 있습니다. 플라스미드 DNA 추출 과정에서는 세포벽 용해, 세포막 파괴, 염색체 DNA와 플라스미드 DNA 분리 등의 단계를 거치게 됩니다. 이를 통해 순수한 플라스미드 DNA를 얻을 수 있습니다. 1. Plasmid and Plasmid DNA preparation Plasmids a...2025.05.12
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단백질 정량 분석: BCA assay2025.01.021. 단백질 정량 분석 BCA assay는 단백질 정량 분석 방법 중 하나로, 단백질 시료에 BCA 시약을 가한 후 흡광도를 측정하여 단백질 농도를 구하는 방법이다. 이 방법은 단백질에 의해 환원된 구리 이온이 BCA와 반응하여 보라색 화합물을 형성하는 원리를 이용한다. 표준 단백질로 BSA를 사용하여 표준곡선을 그린 후, 미지의 단백질 시료의 흡광도를 대입하여 농도를 계산할 수 있다. BCA assay는 단백질의 아미노산 조성에 크게 영향을 받지 않아 비교적 정확한 정량이 가능하다는 장점이 있다. 1. 단백질 정량 분석 단백질 정...2025.01.02
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[생화학실험] A+, 세포파쇄 및 단백질 정량법 실험2025.01.031. 세포막 구조 동·식물(진핵세포)의 세포막은 단백질과 인지질로 구성된 이중막 구조이며, 박테리아(원핵세포)의 세포막도 이와 유사한 구조를 가지고 있다. 단백질은 온도, pH 등의 요인에 의해 구조와 기능이 변화할 수 있다. 2. 세포 파쇄 방법 세포막을 파쇄하여 세포 내 단백질 및 대사체를 안정적으로 추출하는 다양한 방법이 있다. 초음파 파쇄, 칼날 분쇄, 막자와 막자사발 분쇄, 효소 파쇄, 삼투압 파쇄, 알칼리 처리, 압착법 등이 있으며 각각의 원리와 특징이 다르다. 3. 단백질 추출 및 정량 단백질은 온도, pH 등의 요인에...2025.01.03
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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <6주차. Plasmid DNA Miniprep> 레포트2025.01.201. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아 내에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적 복제가 가능한 복제 기점을 가지고 있습니다. 생존에 필수적이지 않은 정보를 담고 있으며, 항생제 내성 유전자 같은 선택적 마커가 포함되기도 합니다. 이를 통해 항생제가 포함된 배지에서 cell-selection을 진행할 수 있으며, 이로부터 유전자 발현 여부를 조사할 수 있습니다. 또한 plasmid DNA는 super coiled 형태의 DNA로, 유전자 조작, 분리, cloning 등 유전공학 분야에 용이하게...2025.01.20
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헤모글로빈 측정 시험2025.01.131. 헤모글로빈 측정 헤모글로빈(Hb)의 농도를 측정하는 실험이다. 헤모글로빈 농도 측정은 빈혈을 진단하는 필수적인 생화학적 조사 방법이며, 적혈구 증가증의 중요한 지표가 되므로 헤모글로빈 농도 측정 실험을 숙지할 수 있어야 한다. 또한 많은 실험에서 사용되는 micro 피펫의 사용법을 숙지한다. 2. 분광광도계 사용 분광광도계는 빛을 이용하여 투과/반사율 등을 측정하여 샘플과 미지 시료의 구성, 농도 등을 측정할 수 있는 기계로서 광원, 검출기, 단색 화장치로 구성되어 있다. 분광광도계를 사용하여 시료의 흡광도를 측정할 때는 반드...2025.01.13
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