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생화학실험 탄수화물 정량분석 결과보고서(예비x)2025.05.061. DNS법과 PSA법의 공통점과 차이점 DNS법과 PSA법은 비색분석법을 이용한다는 공통점을 가지고 있습니다. 즉, 색의 세기를 비교하여 분석물의 농도를 분석하는 방법을 사용하며, 이 두 방법은 농도별 흡광도를 이용하여 미지시료 속에 있는 Glucose의 농도를 정량합니다. 하지만 DNS법은 PSA법과 달리 모든 당을 분석할 수 없습니다. DNS법은 환원작용을 이용하여 정량분석하기 때문에 환원당에 한해서만 정량분석이 가능한 반면, PSA법은 강한 무기산으로 모든 종류의 탄수화물을 가수분해 할 수 있습니다. 그래서 PSA법이 DN...2025.05.06
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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전기영동을 이용한 단백질의 관찰(생화학실험)2025.01.161. 전기영동 전기영동은 전극 사이의 전기장 하에서 용액 속의 전하가 반대 전하의 전극을 향하여 이동하는 화학현상이다. 겔 전기영동법은 전기영동 현상을 단백질 분석에 응용한 초기 형태로, 단백질 크기에 따라 분리가 가능하다. 전기영동 실험에서는 SDS 처리를 통해 단백질의 전하를 균일하게 만들어 오직 크기에 따른 분리가 이루어지도록 한다. 또한 isoelectric focusing과 2D 전기영동법 등 다양한 전기영동 기법이 있다. 2. 겔 제조 겔은 acrylamide와 bisacrylamide를 혼합하여 중합 반응을 통해 만든다...2025.01.16
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Western blot 보고서2025.05.071. Western blot Western blot은 특정 단백질을 검출하는 기법으로, 단백질 혼합물을 전기영동으로 분리하고 membrane에 옮긴 후 항원-항체 반응을 이용하여 목표 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 과정에는 샘플 준비, 전기영동, blotting, 검출 등의 단계가 포함된다. 2. 단백질 분리 단백질 혼합물은 SDS-PAGE를 통해 크기에 따라 분리된다. SDS는 단백질의 이차, 삼차 구조를 풀어 단백질이 분자량에 따라 이동할 수 있게 한다. 전기영동 후 단백질은 membrane으로 옮겨진다. 3. 항원-항체 반응...2025.05.07
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 14주차 생쥐 비장에서 면역세포 분리 후 면역염색 및 유세포 분석2025.05.041. 면역세포 분리 생쥐 비장에서 면역세포를 분리하는 실험을 수행했습니다. 비장은 림프조직의 일종으로, 면역세포가 많이 존재하는 기관입니다. 이 실험에서는 비장에서 림프구, 대식세포, 수지상세포 등의 면역세포를 분리하고 이를 면역염색 및 유세포 분석을 통해 확인했습니다. 2. 면역염색 분리한 면역세포에 대해 면역염색을 실시했습니다. 면역염색은 세포 표면의 특정 단백질을 형광물질로 표지하여 세포를 구분하는 기법입니다. 이를 통해 B 림프구, T 림프구, 대식세포, 수지상세포 등 다양한 면역세포 아집단을 구분할 수 있습니다. 3. 유세...2025.05.04
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A+ 생화학실험 <3주차. Agarose Gel Electrophoresis> 레포트2025.01.201. 겔 전기영동 겔 전기영동은 분자의 크기나 전하에 따라 DNA, RNA, 단백질을 비롯한 생물학적 분자들을 분리하는 실험방법 중 하나입니다. 전기영동의 원리는 gel matrix (주로 agarose 혹은 polyacrylamide) 내에 시료를 넣고, 양극과 음극으로 전기장을 가하면 분자들이 전하의 성질에 따라 이동하게 되는 것입니다. 분자의 크기 및 전하밀도에 따라 이동 속도에 차이가 발생하기 때문에, 서로 다른 크기 혹은 전하를 가진 분자들을 분리할 수 있습니다. 겔 전기영동에서 분자의 이동속도에 영향을 미치는 요인에는 입...2025.01.20
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 9주차 흡광광도법2025.05.041. absorption spectrophotometry 흡광광도법은 빛의 흡수 정도를 측정하여 물질의 농도를 분석하는 기술입니다. 이 방법은 320~800nm 범위의 파장에서 빛의 흡수를 측정하며, 흡광도(A)는 투과도(T)의 로그 값으로 계산됩니다. 베르-람버트 법칙에 따르면 흡광도는 물질의 농도, 경로 길이, 몰 흡광 계수의 곱에 비례합니다. 이를 이용하여 표준 검량선을 작성하고 미지 시료의 농도를 측정할 수 있습니다. 2. spectrophotometer 분광광도계는 특정 파장의 빛을 선택적으로 투과시켜 시료의 흡광도를 측정...2025.05.04
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01~1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04