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Polymerase chain reaction2025.01.231. Polymerase chain reaction PCR(Polymerase chain reaction)은 단시간에 DNA의 원하는 부분을 수백만개 이상으로 증폭시키는 기술이다. PCR은 생물학의 거의 모든 분야에서 쓰이지 않는 곳이 없을 정도로 널리 퍼지고 중요한 실험적 기법이며, 그에 따라 상황과 목적, 기술발전에 따라 Multiplex PCR, Long-range PCR, Single-cell PCR등 수많은 파생 기술들이 존재한다. PCR은 크게 Denaturation, Annealing, Extension의 세 과정으로 ...2025.01.23
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PCR과 아가로스 겔 전기영동 실험2025.11.171. PCR (중합효소 연쇄반응) PCR은 DNA 중합효소를 이용해 시험관 내에서 DNA 상의 특정 염기서열을 빠르게 증폭하는 기술입니다. 극히 소량의 DNA만으로도 증폭이 가능하며, denaturation, annealing, extension의 3단계가 1 cycle을 구성합니다. 이 실험에서는 35 cycle이 진행되어 이론상 2^35개의 DNA가 생성됩니다. Pre-denaturation 단계에서 template DNA를 단일가닥으로 분리하고, denaturation에서 이중가닥 DNA의 수소결합을 파괴합니다. Anneali...2025.11.17
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유전자 클로닝을 위한 수용성 세포 제작과 DNA 증폭2025.12.191. 수용성 세포(Competent Cell) 제작 형질 전환을 위해 외부 DNA를 받아들일 수 있도록 물리적, 화학적 처리를 통해 박테리아를 준비하는 과정이다. 본 실험에서는 E.coli DH5α 균주를 사용하여 염화칼슘 처리, 냉각, 열 충격 방법으로 수용성 세포를 유도했다. Exponential phase의 세포를 사용하여 OD600 값이 0.4~0.6일 때 배양액을 ice에서 냉각하고, 원심분리 후 염화칼슘 용액과 글리세롤을 처리하여 -80°C에서 보관한다. 2. 형질 전환(Transformation)과 효율 계산 외부 유전...2025.12.19
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Plasmid DNA miniprep2025.05.141. Plasmid DNA Plasmid DNA는 bacteria에 존재하는 extrachromosomal DNA로, 자체적으로 복제 가능한 복제기점을 갖고 있다. Plasmid DNA는 genomic DNA와 달리 생존에 필수적이지 않은 정보를 포함하고 있으며, 이를 이용하여 유전자 발현 여부를 조사할 수 있다. Plasmid DNA는 supercoiled DNA 형태를 가지고 있어 유전자 분리, 조작, cloning 등 유전공학에 활용되기 쉽다. 2. Plasmid DNA extraction Plasmid DNA를 활용하기 위해...2025.05.14
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PCR 관련 퀴즈 및 정답(생화학) A+ 과제레포트2025.01.201. PCR의 3단계 procedures PCR 반응요소에는 Target DNA, Primers (oligonucleotides complementary to target), Nucleotides(dATP, dCTP, dGTP, dTTP), Thermostable DNA polymerase가 있다. PCR의 세 가지 반응 단계는 DNA 변성 (Denaturation), primer 의 Annealing, 신장 반응 (Extension)이다. DNA 변성 단계에서는 95℃의 열을 가해 DNA 이중 가닥을 분리시킨다. Annealing...2025.01.20
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Western Blotting 레포트2025.01.211. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정입니다. 이 방법에는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antib...2025.01.21
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PCR 및 전기영동을 통한 DNA 증폭 및 분석2025.12.121. PCR (중합효소 연쇄반응) PCR은 DNA 중합효소를 이용하여 DNA의 양을 증폭시키는 기술이다. 온도 변화에 따른 DNA 변성을 이용하며, Pre-denaturation, Denaturation, Annealing, Extension, Post-extension, Cooling의 6단계로 진행된다. 2~4단계를 1 cycle이라 하며 반복할 때마다 2^n의 DNA가 증폭된다. PCR의 조성은 Template DNA, Primer(F/R), Taq polymerase, dNTP, 10X buffer, 증류수로 구성되며 각각 ...2025.12.12
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[생명공학 레포트] gDNA isolation 및 T7E1 assay를 통한 genome editing 확인2025.05.031. gDNA isolation gDNA는 plasmids와 같은 extra-chromosomal DNAs와는 다르게 chromosomal DNA를 의미한다. gDNA를 분리하는 단계에서는 cell과 CLS(Cell Lysis Solution), proteinase K를 섞어 DNA 추출을 위해 cell을 파괴하는 역할을 한다. CLS에는 SDS, Tris-HCl, EDTA 등이 들어가 있으며, SDS는 cell membrane의 lipid를 제거하고, Tris-HCl은 pH 변화를 방지하며, EDTA는 세포 내의 DNases의 역...2025.05.03
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PCR을 진행하기 위한 Primer design 및 전기영동 레포트 (A+ 평가자료)2025.05.081. Primer design Primer를 designing 하는 과정에서 Primer와 template DNA의 특이적인 결합이 가능할 수 있는 이유에 관하여 의문을 가져볼 수 있었고, Primer의 결합이 정상적으로 이루어지기 위해서는 어떤 조건을 갖추어야 하는지에 관하여 탐구해볼 수 있었다. Primer의 길이, 염기서열 구성, Tm 값 등의 조건을 고려해야 한다는 것을 알 수 있었다. 2. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR 과정을 거쳐 target으로 하는 DNA A를 전기영동을 해보았고, 그...2025.05.08
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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