[의학]rat에서 islet을 isolation(분리)하는 방법

소개

rat또는 mice에서 islet을 분리해 내는 protocol을 정리했습니다. 실질적으로 사용되는 방법을 쉽게 정리했습니다. 참고하세요~^^

목차

1.준비물
1 ). 기기
2) 기구
3)시약

2.과정

본문내용

<Procedure>
1. 마취
2. 면도, 동물 고정 & 알코올.
3. 개복 & 개흉후, 복강에 saline 뿌림.
4. colon을 아래로 복강 밖으로 꺼내고, CBD의 duod. end를 mosquito로 잡음.
5. 수술대를 돌린 후 CBD의 proximal side를 dissect한다.
6. 27G scalp vein needle를 CBD에 duodenal side를 향해 꽂고 mosquito로 잡음.
7. collagenase 조금 주사하여 CBD로 가는 것 확인하고, IVC를 자름.
8. cold collagenase 10cc를 주사후, 팽창된 췌장을 주위 (대장, 위 & 비장)
로부터 잘라내어 남은 collagenase 2 cc와 함께 50 ml tube on ice에 넣음.
9. 37’C water bath에 16분간 keep (중간에 한번 vortex).
10. cold HBSS 을 총 30 cc될 때까지 넣고 vortex후 총 50 cc로 채워, 1분@1,000 rpm cfg. Or 5분@ 550 g at 4’C 한 후, 상층액을 suction하여 제거.(1st cfg.)
11. pellet을 cold HBSS with heparin 20 cc와 섞어 mesh에 거른다 (새 50 cc tube on ice, funnel, mesh 590 um). 총 50 cc를 2분@1,000 rpm cfg. (2nd cfg)
상층액을 suction하여 제거.(
12. pellet을 cold HBSS 10-15 cc와 섞어 3 pancreases를 한 tube로 모으고, 총 50 cc를 2분@1,000 rpm cfg. (3rd cfg) 후, 상층액을 suction하여 제거
13. pellet에 15 cc of Histopaque 1083(Sigma) 넣고 vortex후, 천천히 5 cc of HBSS 용액을 가하고, 16분@800g at 4’C or 2,200rpm at RT w/o brake cfg.

참고자료

· 없음