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제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 분석2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 주로 세균이 보유한 DNA 절단 효소로, 외부 바이러스의 DNA를 절단하여 자기 보호 기능을 한다. 종류에 따라 4개 또는 6개의 염기서열을 인식하여 비점착성 또는 점착성 말단을 생성한다. 같은 효소로 절단된 부위는 동일한 끝을 가지므로, 표적DNA와 플라스미드를 같은 제한효소로 자르고 ligase로 결합시켜 재조합 DNA를 만들 수 있다. DNA 클로닝 등 분자생물학 연구에 광범위하게 사용된다. 2. 전기영동(Electrophoresis) 전기장의 영향으로 전하를 띤 물...2025.11.17
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[화학과 수석의 A+ 레포트][조교피드백 포함] 박테리아의 형질전환 (생화학실험)2025.01.161. 형질전환 이번 실험에서는 플라스미드와 박테리아를 이용해 형질 전환한다. 클로닝이란 관심있는 DNA를 많이 만들어내기 위해 박테리아를 이용하는 것을 말한다. 박테리아에 관심있는 DNA 조각을 집어넣고 키우면 관심있는 DNA도 여러개 만들 수 있게 된다. 플라스미드는 박테리아에 DNA를 넣어주기 위한 운반체 역할을 한다. 형질전환 시키는 방법으로는 화학적처리법과 전기천공법이 있으며, 이번 실험에서는 화학적 처리방법으로 CaCl2를 넣어주는 방법을 사용했다. 2. 플라스미드 플라스미드란 세균의 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 ...2025.01.16
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재조합 DNA 구성 및 대장균에서의 GFP 발현2025.11.121. 재조합 DNA 구성 재조합 DNA는 서로 다른 출처의 DNA 단편을 결합하여 새로운 DNA 분자를 만드는 기술입니다. 제한효소를 이용하여 DNA를 절단하고 DNA 리가제로 연결하는 과정을 통해 목적하는 유전자를 벡터에 삽입합니다. 이 기술은 유전공학의 기초가 되며 단백질 생산, 유전자 치료 등 다양한 분야에 응용됩니다. 2. GFP 형질전환 GFP(Green Fluorescent Protein)는 녹색 형광 단백질로, 자외선 또는 청색광에 노출되면 녹색 형광을 발합니다. GFP 유전자를 대장균에 형질전환하면 형광 단백질을 생산...2025.11.12
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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A+ 생화학실험 <12주차. Protein expression> 레포트2025.01.201. 발현 벡터 (pET vector) 발현 벡터(expression vector)는 분자 클로닝 결과로 얻은 재조합 DNA를 competent cell을 비롯한 다른 세포에 전달하는 데 사용한다. pET 벡터는 E. coli에서 재조합 단백질을 발현하기 위해 사용하는 대표적인 발현 벡터이다. pET 벡터는 플라스미드에 해당하나, 이 외에도 viral vector나 artificial chromosome 등이 발현 벡터로 사용될 수 있다. 발현 벡터의 역할을 하기 위해서는 세포 내에서 자가 복제가 가능해야 하며, 제한 효소에 의한 ...2025.01.20
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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동물·식물 세포 구조 및 분열 관찰, 미생물 분리를 통한 생물 다양성과 분류 방법 고찰2025.01.291. 동물 및 식물 세포의 구조와 모양 비교 동물세포와 식물세포의 구조와 모양을 비교 관찰하였다. 동물세포인 구강 상피 세포는 불규칙한 모양과 배열을 보였고, 세포질과 핵이 모두 염색되었다. 반면 식물세포인 양파 표피 세포는 규칙적인 배열을 보였고, 핵만 염색되었다. 이는 식물세포의 세포벽이 세포 구조 유지에 도움을 주기 때문이다. 또한 식물세포가 동물세포보다 크게 관찰된 이유도 세포벽 때문이다. 하지만 세포 소기관들은 광학 현미경으로는 관찰하기 어려워, TEM이나 원심분리 등의 방법을 제안하였다. 2. 체세포 분열과 감수분열 관찰...2025.01.29
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DNA 조작과 유전자 치료 기술2025.11.181. 유전자 재조합 기술 한 생물의 유전자 일부를 분리하여 원하는 기능을 가진 유전자를 연결해 새로운 유전자를 만드는 기술이다. 대장균의 플라스미드에 원하는 유전자를 붙여 증식시키는 방식으로 진행된다. 장점으로는 대량생산 가능, 농약 사용 감소, 식량문제 해결이 있으며, 단점으로는 항생제 내성, 생태 다양성 파괴, 윤리적 문제가 있다. 2. 유전자 편집 기술과 유전자 가위 목적 유전자를 선택적으로 제거하거나 염기치환을 통해 돌연변이를 일으키는 생명공학 기술이다. 유전자 가위는 DNA 특정 부위를 인식하고 절단하는 분자생물학적 도구로...2025.11.18
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형질전환과 블루-화이트 스크리닝 실험2025.11.171. 형질전환(Transformation) 형질전환은 외부의 DNA 또는 플라스미드가 세포에 도입되어 새로운 유전형질을 획득하는 현상입니다. 자연계에서는 세균 성장 곡선의 정체기에 주로 발생하지만, 실험실에서는 화학적 또는 물리적 처리를 통해 수용능 있는 세포(competent cell)를 만들어 효율적으로 형질전환을 수행합니다. 본 실험에서는 CaCl2 처리를 통해 TOP10 E.coli competent cell을 준비하고, heat shock 방식으로 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입했습니다. 2. 블루-화이트 스크리닝(Bl...2025.11.17
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제한효소 절단 실험 결과 분석 및 고찰2025.11.141. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을 절단하는 핵산분해효소로, 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해 사용되는 특수한 효소이다. 형태, 절단 위치, 절단 서열의 모양, 조효소 유무에 따라 제1형부터 제5형으로 분류된다. 실험에 사용된 EcoR1은 대장균에서 분리된 제2형 제한효소로, 'GAATTC' 염기서열을 인식하여 절단하며 5'-돌출 점착성 말단을 형성한다. 활성화를 위해서는 pH7.5, 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 37°C 조건이 필요하다. 2....2025.11.14
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