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RNA 추출 및 정량 실험 결과보고서2025.11.111. RNA 추출 방법 Trizol, phenol, GITC를 이용한 homogenization으로 시작하여 chloroform을 통한 phase separation, isopropanol을 이용한 RNA 침전, 75% EtOH를 이용한 세척 과정을 거친다. Trizol은 산성 phenol로 단백질과 지질을 분해하고 GITC는 RNase를 억제한다. Chloroform은 유기용매로 phenol을 유기층으로 분리시키며, 원심분리를 통해 aqueous phase(RNA), interphase(DNA), organic phase(단백질,...2025.11.11
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일반생물학실험 결과레포트 [실험9] 핵산과 단백질 정량2025.05.131. 핵산 정량 실험을 통해 추출한 plasmid DNA의 농도를 spectrophotometer로 측정하였다. 측정 결과 DNA 농도는 52.00ug/ml로 나타났다. DNA의 순도를 확인하기 위해 A260/A280과 A260/A230 비율을 계산하였다. A260/A280 비율은 2.080으로 순수한 DNA 범위인 1.8-2.0을 벗어나 있어 DNA가 손상되었거나 오염되었음을 알 수 있다. A260/A230 비율은 0.881로 순수한 DNA 범위인 2.0-2.2를 크게 벗어나 있어 EDTA, 탄수화물, 유기용매 등의 오염이 있는 ...2025.05.13
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[A+ 보장!] 연세대 의대 의예과 1학년 General Biology 실험 레포트 Plasmid DNA mini-preparation and gel electrophoresis2025.01.141. 대장균 대장균은 인간을 비롯한 동물의 대장과 소장에서 발견되는 박테리아의 일종이다. 대장균은 인간에게 해를 끼치지 않으며 오히려 영양분을 소화하고 흡수하는 과정에서 인간에게 도움을 준다. 하지만 경우에 따라 식중독이나 콜레라를 유발하는 병원균으로 작용할 수 있다. 대장균은 산소의 농도나 온도의 변화에 영향을 상대적으로 받지 않으며 다양한 물질로부터 에너지를 얻을 수 있는 능력이 있어 빠르게 번식하고 쉽게 죽지 않는다. 이러한 특징 때문에 대장균은 생명공학이나 유전체 연구에서 자주 사용되는 생물이다. 2. 플라스미드 DNA 추출...2025.01.14
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플라스미드 DNA 분리 실험 결과 및 분석2025.11.141. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 이중가닥 DNA가 원형으로 된 것으로 숙주세포의 염색체와는 독립적으로 복제되는 분자이다. 대부분의 세균에 존재하고 효모 등 일부 진핵세포 생물 내에도 존재한다. 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 자른 뒤 필요로 하는 유전자를 삽입하여 다시 세균에 넣어 배양할 수 있어 벡터 DNA로 불린다. 2. 알칼리 용해 방법 플라스미드 DNA 추출에 사용된 용해 방법으로, 높은 pH의 알칼리성 음이온 계면활성제를 이용하여 대장균 세포를 용해시키고 플라스미드 DNA를 염색체 DNA와 분...2025.11.14
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식물 유전체 DNA 추출 및 형질전환 식물 선별2025.11.121. 식물 유전체 DNA 추출 식물 세포로부터 유전체 DNA를 분리하고 정제하는 과정입니다. 식물 조직을 분쇄하여 세포벽을 파괴한 후, 적절한 완충액과 효소를 사용하여 DNA를 추출합니다. 추출된 DNA는 에탄올 침전을 통해 정제되며, 최종적으로 고순도의 유전체 DNA를 얻을 수 있습니다. 이는 분자생물학 실험의 기초가 되는 중요한 기술입니다. 2. T-DNA 유전형 분석 T-DNA는 아그로박테리움 투메파시엔스에서 식물 세포로 전달되는 DNA 영역입니다. T-DNA 유전형 분석은 PCR 기법을 이용하여 형질전환 식물에 T-DNA가 ...2025.11.12
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아가로스 젤 전기영동 실험 예비2025.11.131. 아가로스 젤 전기영동 아가로스 젤 전기영동은 DNA, RNA, 단백질 등의 생물학적 거대분자를 크기에 따라 분리하는 실험 기법입니다. 아가로스 젤에 전기장을 가하면 음전하를 띤 핵산 분자들이 양극으로 이동하며, 분자의 크기가 작을수록 젤의 기공을 통과하기 쉬워 더 멀리 이동합니다. 이를 통해 DNA 단편의 크기를 측정하고 유전자 분석, PCR 산물 확인 등 다양한 분자생물학 실험에 활용됩니다. 2. 젤 매트릭스와 완충액 아가로스는 해조류에서 추출한 다당류로, 농도에 따라 젤의 기공 크기가 결정됩니다. 일반적으로 0.8-1.5%...2025.11.13
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Plasmid DNA 정제2025.01.131. 대장균(E. coli) 대장균(E.coli)은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명된 박테리아이다. 특징으로는 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않으며, 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)크기이고, 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA란 세균 속에 주 DNA와 별도로 존재하면서 증식할 수 있는 고리 형태의 DNA로, 원핵생물과 효모 등에서 발견된다. 대장균 세포에서 분리된 Plasmid DNA는 sup...2025.01.13
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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크로마토그래피에 의한 단백질 정제 탐구2025.01.291. 단백질 정제 단백질 정제는 정제된 단백질을 분리하고 얻는 과정이다. 유전자 재조합 이후, 단백질 발현 과정을 거쳐 단백질 정제 단계에서 단백질을 정제할 수 있는 다양한 크로마토그래피 기법이 있다. 이러한 기술을 통해 특정 단백질을 정밀하게 분리할 수 있으며 바이오 의약품, 생명공학 및 기초 연구 분야에 적용하여 활용될 수 있다. 2. 크로마토그래피 기법 크로마토그래피는 단백질 정제에 사용되는 다목적 기술로, 전하 기반 분리를 위한 이온 교환, 특정 결합 상호작용을 활용한 친화성, 크기 기반 분리를 위한 크기 배제가 포함된다. ...2025.01.29
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형질 전환 실험: 원핵 세포의 유전자 조작2025.11.141. 형질 전환(Transformation) 형질 전환은 외부에서 만들어진 plasmid를 plasmid가 없는 원핵 세포에 삽입하여 새로운 유전형질을 나타내게 하는 과정입니다. 제한효소를 이용하여 plasmid의 특정 부위를 절단하고 원하는 염기서열을 삽입합니다. Competent cell을 CaCl₂로 처리하여 외부 DNA를 쉽게 받아들일 수 있는 상태로 만들고, 42°C heat-shock과 ice bucket 처리를 통해 plasmid를 세포 내로 도입합니다. 이 과정은 인슐린 생산 등 의약품 개발에 광범위하게 활용됩니다. ...2025.11.14
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