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Gel extraction & TA cloning 실험 보고서2025.11.171. Gel Extraction Agarose gel 전기영동으로 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 기술이다. FADF buffer를 이용해 gel을 용해한 후, silica membrane을 가진 column에 DNA를 결합시키고 wash buffer로 불순물을 제거한 후 ddH2O로 elution하는 과정으로 진행된다. Chaotropic salt가 포함된 FADF buffer는 silica membrane의 O-와 DNA의 인산기 사이에 cation bridge를 형성하여 DNA 부착을 가능하게 한...2025.11.17
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DNA cloning 방법/enzyme, transformation, selection mark/생화학 보고서2025.01.201. DNA cloning 방법 DNA cloning은 타깃 유전자를 박테리아의 게놈에서 잘라내어 plasmid에 삽입하는 과정입니다. 이 과정에서 restriction enzyme을 사용하여 유전자를 자르고, ligase를 사용하여 유전자를 plasmid에 붙입니다. 이렇게 만들어진 recombinant vector는 박테리아에 형질전환되어 증폭됩니다. 형질전환 과정에서는 열처리를 통해 세포막을 열어 plasmid가 들어가게 하며, 항생제 내성 유전자를 선별 마커로 사용하여 형질전환된 세포를 선별합니다. 2. Enzyme 사용 D...2025.01.20
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서울대 생물학실험 A+ 실험 보고서 32025.05.101. DNA 클로닝과 형질전환 DNA 클로닝은 원하는 DNA 조각을 복제하여 여러 개의 DNA 복사본을 얻는 과정을 의미합니다. 이를 위해 DNA 조각은 벡터라고 불리는 DNA 분자와 재조합되는 과정을 거치며, DNA 조각은 클로닝하고자 하는 유전자나 특정한 염기 서열을 포함하고 있습니다. 일련의 과정 후 복제된 클론은 세포에 삽입되며, 복제 및 유전자 발현에 이용됩니다. 이렇듯 외부 DNA가 도입되며 세포의 유전 형질에 변화가 생기는 경우를 형질 전환이라 일컫는데, 일반적으로 형질 전환에는 plasmid 벡터가 사용됩니다. 2. ...2025.05.10
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Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트2025.01.211. Plasmid DNA와 Vector Plasmid DNA는 박테리아 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 원형 DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 박테리아로부터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA 클로닝을 위한 핵심적인 도구이다. Vector에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, 클로닝이 이루어진 후 많은 박테리아 중에서 vector를 가지고 있는 박테리아만 분리할 수 있도록 하는...2025.01.21
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[A+ 보장!] 연세대 의대 의예과 1학년 General Biology 실험 레포트 Genomic DNA extraction2025.01.141. DNA 클로닝 DNA 클로닝은 제한 효소를 이용하여 특정한 유전자를 절단하는 과정에서 시작한다. 제한 효소는 특정한 염기들의 서열을 인식하고 이를 절단하는 기능을 수행한다. 또한 제한 효소는 종류에 따라 점착 말단과 무딘 말단을 형성한다. 다음으로 표적 유전자를 벡터에 삽입해야 하며, 이 과정에서 DNA 연결 효소가 사용된다. 마지막으로 재조합 플라스미드를 박테리아에 다시 도입한다. 2. 젤 전기영동 젤 전기영동은 동일한 DNA를 찾는 과정에서 유용하게 사용된다. 동일한 DNA를 동일한 제한 효소로 처리한다면 동일한 길이의 D...2025.01.14
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유전자와 유전자 활성 연구를 위한 분자도구2025.01.181. 서던블롯 서던블롯은 특정 DNA 절편을 동정하는 데 사용되는 기술입니다. 이 방법은 genomic DNA를 제한효소로 자른 후 아가로스 겔 전기영동을 통해 크기별로 분리합니다. 그리고 DNA를 변성시켜 nitrocellulose 또는 nylon 멤브레인으로 이동시킵니다. 이렇게 이동된 DNA는 방사선 동위원소나 비방사선 물질로 표지된 DNA 또는 RNA 탐침과 하이브리다이제이션되어 자기방사법 등을 통해 검출됩니다. 이 기술은 genomic DNA뿐만 아니라 plasmid, cosmid, bacteriophage 등의 분석에도 ...2025.01.18
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플라스미드 DNA 준비 및 제한효소 지도 작성2025.11.121. 플라스미드 DNA 준비 플라스미드는 박테리아 세포에서 발견되는 작은 원형 DNA 분자로, 유전자 공학 실험에서 중요한 벡터로 사용됩니다. 플라스미드 DNA 준비 과정은 박테리아 배양, 세포 용해, DNA 추출 및 정제 단계를 포함하며, 순수한 플라스미드 DNA를 얻기 위해 여러 정제 기법이 적용됩니다. 이 과정을 통해 얻은 플라스미드는 분자생물학 연구와 유전자 클로닝에 필수적인 재료입니다. 2. 제한효소 지도 작성 제한효소 지도(Restriction map)는 DNA 분자 위에서 특정 제한효소의 인식 부위와 절단 위치를 나타내...2025.11.12
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DNA 클로닝 및 PCR 실험을 통한 DNA 기술 이해2025.11.161. DNA 클로닝 및 형질전환 DNA 클로닝은 원하는 DNA를 조작하고 복제하여 많은 복제 DNA를 얻는 기술입니다. 형질전환은 외부 유전자를 세포 내로 넣어 숙주세포가 새로운 유전형질을 갖게 되는 과정입니다. E.coli의 형질전환은 화학적 형질전환과 전기천공법으로 나뉘며, 화학적 형질전환은 CaCl2를 처리하여 세포벽을 중성화하고 heat shock을 통해 DNA 이동을 촉진합니다. Plasmid는 origin, MCS, lacZ 유전자, ampicillin resistance gene으로 구성되어 있습니다. 2. PCR(중합...2025.11.16
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DNA 연결 및 형질전환 실험 예비2025.11.131. DNA Ligation (DNA 연결) DNA 연결은 DNA ligase 효소를 이용하여 두 개의 DNA 분자를 공유결합으로 연결하는 과정입니다. 제한효소로 절단된 DNA의 5' 인산기와 3' 수산기 사이의 포스포디에스터 결합을 형성하여 DNA 분자를 연결합니다. 이 과정은 재조합 DNA 기술에서 벡터와 삽입 DNA를 연결하는 데 필수적인 단계입니다. 2. Transformation (형질전환) 형질전환은 외부에서 도입된 DNA가 세포 내로 들어가 세포의 유전자형을 변화시키는 과정입니다. 박테리아의 경우 화학적 방법이나 전기천...2025.11.13
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아주대 생명과학실험 Plasmid DNA 추출2025.01.131. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 원핵세포의 세포질 및 진핵생물의 세포 소기관에서 발견되는 작고 원형의 이중 가닥 DNA 분자이다. 이 DNA 조각들은 자율적으로 복제할 수 있으며, 세포의 염색체 DNA와는 독립적으로 존재한다. 플라스미드는 보통 추가적인 유전 정보를 포함하고 있으며, 특정 환경 조건에서 숙주 세포에 유익할 수 있는 기능들을 부여한다. 2. 제한효소 제한효소(EcoRI)는 플라스미드 DNA를 실험실에서 조작하기 위한 주요 도구이다. 이 효소는 특정 짧은 DNA 서열을 인식하고 절단할 수 있는 능력이 있어, ...2025.01.13
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