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아주대학교 A+생명 실험 DNA추출2025.01.121. 플라스미드 DNA 추출 이번 실험에서는 원심분리와 다섯가지의 Buffer를 이용하여 플라스미드 DNA를 추출해냈습니다. 추출한 플라스미드 DNA를 아가로스 겔 전기영동을 통해 확인한 결과, Supercoiled 플라스미드 DNA를 확인할 수 있었습니다. Supercoiled 플라스미드 DNA는 플라스미드 DNA를 분리한 후 가장 흔하게 보이는 구조이며, 크기는 약 2.0kb, DNA Mass는 52ng으로 나타났습니다. 2. 원핵세포와 진핵세포의 차이 원핵세포와 진핵세포는 구조와 구성 요소에 차이가 있기 때문에 유전자를 추출할...2025.01.12
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아주대 생명과학실험 Plasmid DNA 추출2025.01.131. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 원핵세포의 세포질 및 진핵생물의 세포 소기관에서 발견되는 작고 원형의 이중 가닥 DNA 분자이다. 이 DNA 조각들은 자율적으로 복제할 수 있으며, 세포의 염색체 DNA와는 독립적으로 존재한다. 플라스미드는 보통 추가적인 유전 정보를 포함하고 있으며, 특정 환경 조건에서 숙주 세포에 유익할 수 있는 기능들을 부여한다. 2. 제한효소 제한효소(EcoRI)는 플라스미드 DNA를 실험실에서 조작하기 위한 주요 도구이다. 이 효소는 특정 짧은 DNA 서열을 인식하고 절단할 수 있는 능력이 있어, ...2025.01.13
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대장균 배양과 형질전환, 플라스미드 DNA 분리 및 전기영동2025.11.171. 대장균 배양 및 형질전환 대장균(Escherichia coli)은 유전공학 연구에 가장 널리 사용되는 박테리아로, 약 2μm 길이에 0.8μm 폭의 크기를 가지며 약 460만 개의 염기쌍으로 이루어져 있다. 형질전환은 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어 새로운 유전형질을 얻게 하는 과정이다. 본 실험에서는 Competent cell에 플라스미드 DNA를 도입하기 위해 열 충격 방법을 사용했으며, 45℃에서 1분간 열충격을 주어 세포막을 불안정하게 해 플라스미드가 세포 내로 들어갈 수 있도록 했다. 형질전환된 세포는 항생제 저항성...2025.11.17
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플라스미드 DNA 추출 예비 레포트2025.01.031. 플라스미드 DNA 추출 이 예비 레포트는 플라스미드 DNA 분리 방법을 이해하고 순수한 플라스미드 DNA를 추출하는 실험을 설명합니다. 플라스미드는 세균의 염색체 외부에 존재하는 독립적으로 증식할 수 있는 DNA 분자로, 유전자 클로닝, 유전자 전달, 유용 단백질 생산 등에 활용됩니다. 플라스미드 DNA 추출 방법에는 크기 차이와 구조 차이를 이용하는 방법이 있으며, 주로 알칼리 변성법을 사용합니다. 이 실험에서는 세포 용해, 단백질 제거, DNA 정제 등의 과정을 거쳐 순수한 플라스미드 DNA를 얻는 방법을 설명하고 있습니다...2025.01.03
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플라스미드 DNA의 분리 및 정제 방법2025.01.041. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 세균 세포에서 분리할 수 있으며, 일반적인 total cell DNA 분리 방법과 유사하다. 세포를 배양하여 수확하고 세포 추출물을 만든 후, 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 농축할 수 있다. 그러나 플라스미드 DNA 분리에는 세균 염색체 DNA와의 분리가 중요한 차이점이다. 플라스미드는 세균 염색체에 비해 크기가 작고 구조적 차이가 있어 이를 이용하여 분리할 수 있다. 2. 플라스미드 미니프레프 방법 플라스미드 DNA를 소량으로 분리하는 대표적인 방법으로는 알칼리 용해법,...2025.01.04
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[A+] 연세대학교 생화학실험(2) 3주차 Plasmid and Plasmid DNA preparation2025.05.121. Plasmid and Plasmid DNA preparation 이 자료는 플라스미드와 플라스미드 DNA 준비에 대한 내용을 다루고 있습니다. 플라스미드는 세포 염색체와는 별도로 존재하는 자기 복제 DNA 분자로, 다양한 클로닝 사이트를 가지고 있습니다. 플라스미드 DNA 추출 과정에서는 세포벽 용해, 세포막 파괴, 염색체 DNA와 플라스미드 DNA 분리 등의 단계를 거치게 됩니다. 이를 통해 순수한 플라스미드 DNA를 얻을 수 있습니다. 1. Plasmid and Plasmid DNA preparation Plasmids a...2025.05.12
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플라스미드 DNA 분리 실험 결과 및 분석2025.11.141. 플라스미드 DNA 플라스미드 DNA는 이중가닥 DNA가 원형으로 된 것으로 숙주세포의 염색체와는 독립적으로 복제되는 분자이다. 대부분의 세균에 존재하고 효모 등 일부 진핵세포 생물 내에도 존재한다. 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 자른 뒤 필요로 하는 유전자를 삽입하여 다시 세균에 넣어 배양할 수 있어 벡터 DNA로 불린다. 2. 알칼리 용해 방법 플라스미드 DNA 추출에 사용된 용해 방법으로, 높은 pH의 알칼리성 음이온 계면활성제를 이용하여 대장균 세포를 용해시키고 플라스미드 DNA를 염색체 DNA와 분...2025.11.14
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박테리아 형질전환(Bacterial Transformation) 실험 보고서2025.11.151. 형질전환(Transformation)의 정의 및 원리 형질전환은 외부 유전자를 세포에 도입하여 새로운 유전 형질을 갖도록 만드는 과정입니다. S형균의 DNA를 R형균에 도입하면 R형균이 S형균으로 변화하며, 이는 원핵생물의 유전적 다양성 확보 전략입니다. 자연 상태에서 형질전환이 일어나려면 DNA 결합 단백질, Type IV pili, Type II secretion system 등이 관여하며, 환경 영향(집단 밀도, 영양분 고갈, DNA 손상)에 따라 유도됩니다. 외래 DNA 도입 방법으로는 접합(conjugation)과 형...2025.11.15
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제한효소를 이용한 플라스미드 DNA 검증 실험2025.11.151. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 특정 DNA 서열을 인식하여 절단하는 단백질로, 분자생물학 실험에서 DNA 분석 및 조작에 필수적으로 사용된다. 본 실험에서는 EcoR1 제한효소를 사용하여 플라스미드 DNA를 절단하고, 삽입된 DNA의 위치와 크기를 확인하는 데 활용된다. 제한효소는 특정 인식 부위에서만 작용하므로 정확한 DNA 구조 분석이 가능하다. 2. 플라스미드 DNA 검증 Mini-prep 방법으로 획득한 DNA가 실제 플라스미드 DNA인지 확인하는 과정이다. 제한효소를 이용한 제한 소화(Rest...2025.11.15
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미니프렙을 통한 플라스미드 DNA 분리 및 정량2025.11.161. 미니프렙(Minipreparation) 방법 E. coli에 형질전환된 플라스미드를 미니프렙 방법으로 분리하는 실험이다. Solution I(glucose, Tris-Cl, EDTA)에서 세포 용해 준비, Solution II(SDS, NaOH)에서 세포 용해 및 DNA 변성, Solution III(potassium acetate, glacial acetic acid)에서 중화 과정을 거친다. 최종 DNA 농도는 0.2322 µg/µl이었다. 효율 향상을 위해 bacterial pellet 제거, inverting으로 혼합,...2025.11.16
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