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Western Blotting 레포트2025.01.211. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정입니다. 이 방법에는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antib...2025.01.21
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생화학 실험 보고서 - 동물세포 배양 및 관찰2025.01.271. 동물세포 배양 이 실험은 MCF-7 세포를 사용하여 동물세포의 배양 과정을 이해하고 관찰하는 것을 목적으로 합니다. 동물세포는 핵, 세포질, 세포막 등의 세포 내 구조를 가지고 있으며, 세포 간 상호작용을 통해 조직과 기관을 형성합니다. 동물세포 배양을 위해서는 적절한 배지, 온도, pH 등의 조건이 필요하며, 계대배양을 통해 세포를 지속적으로 증식시킬 수 있습니다. 이번 실험에서는 부착성 세포인 MCF-7 세포를 사용하여 배양 과정을 거치고, 현미경으로 세포의 변화를 관찰하였습니다. 2. 세포 배양 기술 세포 배양은 인공적으...2025.01.27
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단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)2025.05.141. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, s...2025.05.14
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[생화학실험] RT-PCR을 통한 간암 세포주에 대한 약물 효능 평가2025.01.291. RT-PCR RT-PCR은 역전사 반응과 PCR 반응을 이용하여 원하는 주형 mRNA의 상보적 염기쌍인 cDNA를 합성, 증폭시키는 분자생물학적 기술이다. 본 실험에서는 RT-PCR을 통해 간암 세포주 HepG2 cell에 처리한 Salsolinol이 Cyclin D1 경로에서 암세포 사멸에 유의미한 결과를 보이는지 관찰하였다. 2. Cyclin D1 Cyclin D1은 세포 주기 조절에 관여하는 단백질로, 암세포의 증식을 억제하는 역할을 한다. 본 실험에서는 Salsolinol 처리가 Cyclin D1 경로를 통해 HepG2...2025.01.29
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(DNA plasmid transfection, Immunoprecipitation)2025.01.231. DNA plasmid transfection DNA plasmid transfection 실험의 목적은 고분자-유전자 복합체를 이용하여 동물 세포에 plasmid DNA를 넣어 세포의 형질을 전환하는 것이다. 이를 위해 먼저 단백질 A에 대한 염기서열 옆에 epitope tag인 V5 폴리펩타이드에 대한 염기서열을 같이 붙여서 플라스미드 DNA를 세포 내에 넣어준다. 그러면 플라스미드가 핵내에 들어가서 DNA 역할을 할 수 있고, 이후 벡터 DNA가 mRNA로 전사되어 V5가 붙은 단백질 A가 발현된다. 2. Immunopre...2025.01.23
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[만점 레포트] 연세대학교 생화학실험(1) 14주차 생쥐 비장에서 면역세포 분리 후 면역염색 및 유세포 분석2025.05.041. 면역세포 분리 생쥐 비장에서 면역세포를 분리하는 실험을 수행했습니다. 비장은 림프조직의 일종으로, 면역세포가 많이 존재하는 기관입니다. 이 실험에서는 비장에서 림프구, 대식세포, 수지상세포 등의 면역세포를 분리하고 이를 면역염색 및 유세포 분석을 통해 확인했습니다. 2. 면역염색 분리한 면역세포에 대해 면역염색을 실시했습니다. 면역염색은 세포 표면의 특정 단백질을 형광물질로 표지하여 세포를 구분하는 기법입니다. 이를 통해 B 림프구, T 림프구, 대식세포, 수지상세포 등 다양한 면역세포 아집단을 구분할 수 있습니다. 3. 유세...2025.05.04
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[생화학실험] A+, 동물세포 배양 및 세포계수2025.01.031. 효소 반응 및 활성 이 실험에서는 효소인 트립신을 이용하여 우유의 주요 단백질인 카제인을 분해하는 과정을 관찰하였다. 온도에 따른 트립신의 활성을 확인하였는데, 0°C에서는 거의 활성이 없었고 37°C와 65°C에서는 카제인이 분해되어 우유의 투명도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 효소 반응에 영향을 미치는 요인 중 온도의 중요성을 알 수 있었다. 2. 단백질 분해 효소 이번 실험에서 사용된 트립신은 단백질을 펩티드로 가수분해하는 효소이다. 트립신은 아르기닌, 리신 등의 C말단 펩티드 결합을 절단하는 엔도펩티다아...2025.01.03
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산성탈인산가수분해효소의 분리 및 정제 결과보고서2025.01.231. 산성 탈인산가수분해효소 이 실험의 목적은 세포 또는 조직(맥아)으로부터 산성 탈인산가수분해효소를 추출하고 정제하여 효소 활성도를 측정하는 것입니다. 산성 탈인산가수분해효소는 주로 리소좀에서 작용하며 다양한 생리적 과정에서 중요한 역할을 합니다. 이 효소는 특정 기질(PNPP)로부터 인산기를 떼어내는 가수분해 반응을 촉매합니다. 실험에서는 원심분리와 여과를 통해 효소를 포함한 상층액을 분리하고, MgCl2와 (NH4)2SO4를 이용한 염석 효과로 효소를 정제하였습니다. 2. 원심분리기 사용 원심분리기 사용 시 주의할 점은 로터의...2025.01.23
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Lowry-Folin법을 이용한 단백질 정량 (생화학 실험)2025.01.161. 단백질 정량 실험 목적은 Lowry 방법으로 수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 정량하는 것입니다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득합니다. Lowry 단백질 분석법은 강알칼리 조건에서 구리 이온과 펩타이드 결합의 반응, 그리고 Folin-Ciocalteu 시약과의 반응을 통해 단백질을 정량합니다. 이 방법은 트립토판, 시스테인, 티로신 등의 아미노산과 반응하여 발색되는 원리를 이용합니다. 2. 분광광도법 분광광도법은 물질에 의한 빛의 흡수 현상을 이용하여 화학물질의 양을 정량하는 방법입니다. ...2025.01.16
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단백질의 분리(생화학실험)2025.01.161. 단백질 단백질이란 생화학에서 생물의 몸을 구성하는 고분자 유기 물질이다. 수많은 아미노산의 연결체로 이루어져 있으며, 생물체 내의 구성 성분, 세포 안의 각종 화학반응의 촉매 역할(효소), 항체를 형성하여 면역을 담당하는 등 여러 가지 형태로 중요한 역할을 수행한다. 2. 단백질 추출 단백질을 추출하기 위해서는 버퍼를 넣고 세포나 조직을 깨뜨려줄 필요가 있다. 세포 및 조직을 깨트리는 방법에는 homogenization, sonication, french pressure cell, grinding, glass bead vort...2025.01.16
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