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[이화여대 생명과학실험1 분반1등 A+ 레포트] ELISA2025.01.211. ELISA ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)는 antigen과 antibody 사이의 interaction을 통해 이들의 정량 혹은 정성적 분석을 하는 기법이다. 이때 사용되는 antibody에는 enzyme이 conjugation 되어 있는데, 해당 enzyme과 특정 substrate가 binding 할 시 발색 반응, 형광 반응, 발광 반응 등을 일으킨다. 이와 같은 반응이 일어난 정도를 측정함으로써 분석을 진행한다. ELISA에는 Direct ELISA, indirect ELISA...2025.01.21
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Catalase Enzyme Activity2025.01.211. Enzyme Enzyme(효소)은 생체 내 여러 가지 화학 반응의 활성화 에너지를 낮추어 촉매 역할을 하는 단백질이다. 이들은 active site의 아미노산 R기와 substate 사이에 결합을 형성하여 반응을 일으킴으로써 체내 대사 작용에 관여하며, 다양한 regulation 기전을 통해 상황에 맞춰 활성화 혹은 비활성화될 수 있다. 또한 enzyme은 substrate를 3차원적으로 인식하여 자신의 active site와 정확히 들어맞는 경우에만 반응을 하는 substrate specificity를 지닌다. 2. Cata...2025.01.21
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catalase enzyme activity2025.01.231. 효소 효소란 생체 내의 화학반응을 매개하는 단백질 촉매로 각각의 효소는 한 가지 물질에만 작용한다. 다른 촉매와 마찬가지로 반응 후에도 효소는 변하지 않고 그대로 남아 있기 때문에 재활용을 하여 다시 활용한다. 특정 반응물과 결합하여 활성화에너지를 낮춰 반응을 촉진하는데, 효소와 결합하는 반응물을 기질이라고 하고 효소에서 기질과 결합하는 특정 부분을 활성부위 또는 기질 결합 부위라고 한다. 2. catalase catalase는 과산화수소분해효소로 H2O2→2H2O+O2의 화학반응을 촉매하는 산화환원효소 중 하나이다. cata...2025.01.23
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Restriction Enzyme Digestion and Gel Electrophoresis 레포트2025.01.211. Plasmid DNA와 Vector Plasmid DNA는 박테리아 세포 내에 염색체와 별도로 존재하면서 독자적으로 복제, 증식할 수 있는 원형 DNA 분자를 말한다. Plasmid Vector는 원하는 특정 유전자를 운반할 수 있고, 한 세대의 박테리아로부터 다음 세대로 전달되기 때문에, DNA 클로닝을 위한 핵심적인 도구이다. Vector에는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site과, 클로닝이 이루어진 후 많은 박테리아 중에서 vector를 가지고 있는 박테리아만 분리할 수 있도록 하는...2025.01.21
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인천대학교 나노바이오실험(1) A 자료) 5. Restriction Enzyme Cutting2025.01.041. Restriction Enzyme Cutting 이번 실험은 지난 실험에서 E.coli 배양액에서 Alkaimen Lysis mothod으로 추출한 plasmid DNA를 restriction enzyme을 사용하여 절단하였다. 그리고 gel electrophoresis를 통해, 절단된 plasma DNA를 확인하는 것을 목표로 하였다. 실험 결과, 5,000~6,000 bp의 band와 700~1,000 bp의 bnad로 2개의 주요한 DNA band를 관찰할 수 있었다. 추가로, gel 아랫부분에 몇 개의 DNA band가...2025.01.04
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DNA Ligation & Transformation, Mini-scale preparation of plasmid DNA Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. DNA Ligation & Transformation 제한효소를 처리하여 얻어낸 insert DNA를 T4 DNA ligase를 이용하여 vector에 삽입한다. DNA strand의 5'에 존재하는 인산기와 3'에 존재하는 OH기 사이에 phosphodiester bond를 형성하여 ligation하고, ligation product를 competent cell에 형질전환한 다음 plate에 ampicillin resistance에 의해 생성된 colony를 selection한다. 2. Mini-scale preparatio...2025.01.18
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효소반응실험 Enzyme activity-Colorimetric of catalase activity2025.01.171. 효소 효소는 생체 내의 화학반응을 촉진하는 생물학적 촉매의 역할을 하는 단백질이다. 이들은 반응의 평형에는 영향을 주지 않으며 반응 속도를 증가시킨다. 효소의 active site에 substrate가 결합한 뒤 반응하여 활성화 에너지를 낮춰 반응을 촉진시킨다. 이 과정은 highly specific하다. 2. 촉매반응 촉매반응은 일반적 산-염기 촉매 작용, 특이적 산-염기 촉매 작용, 공유결합성 촉매 작용, 금속 이온 촉매 작용 등 4가지 정도로 나눌 수 있다. 3. Catalase Catalase는 antioxidant e...2025.01.17
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Stenotrophomonas maltophilia 유래 Oleate Hydratase와 Alcohol dehydrogenase의 Enzyme cascade reaction2025.01.131. Stenotrophomonas maltophilia 유래 Oleate Hydratase Stenotrophomonas maltophilia 유래 Oleate Hydratase(SmOhyA)는 FAD를 cofactor로 사용하는 FAD-dependent enzyme으로, unsaturated fatty acids의 9-cis 위치 이중결합에 대해 선택적으로 수화반응을 일으키는 regioselective hydration을 촉매한다. SmOhyA는 특히 oleic acid에 가장 높은 특정 활성을 지니며, polyunsaturat...2025.01.13
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DNA cloning 방법/enzyme, transformation, selection mark/생화학 보고서2025.01.201. DNA cloning 방법 DNA cloning은 타깃 유전자를 박테리아의 게놈에서 잘라내어 plasmid에 삽입하는 과정입니다. 이 과정에서 restriction enzyme을 사용하여 유전자를 자르고, ligase를 사용하여 유전자를 plasmid에 붙입니다. 이렇게 만들어진 recombinant vector는 박테리아에 형질전환되어 증폭됩니다. 형질전환 과정에서는 열처리를 통해 세포막을 열어 plasmid가 들어가게 하며, 항생제 내성 유전자를 선별 마커로 사용하여 형질전환된 세포를 선별합니다. 2. Enzyme 사용 D...2025.01.20
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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22