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RT-PCR 실험 및 결과 분석2025.05.101. RT-PCR RT-PCR은 RNA를 추출하고 cDNA를 합성하여 PCR로 증폭하는 기술입니다. 이 실험에서는 Labozol을 이용한 RNA 추출, cDNA 합성, GAPDH와 Twist1 유전자의 RT-PCR 증폭을 진행했습니다. RNA 추출 과정에서 chloroform으로 수용성층과 지용성층을 분리하고, isopropanol로 RNA를 침전시켰습니다. 이후 ethanol로 세척하고 DEPC 처리된 물에 재용해하여 RNA 농도와 순도를 확인했습니다. RT-PCR 결과 GAPDH는 일정한 발현을 보였고, Twist1은 chemi...2025.05.10
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RNA 추출, cDNA 합성 및 qRT-PCR2025.01.181. PCR (Polymerase Chain Reaction) PCR은 DNA의 상보적 가닥에 결합하는 2개의 프라이머를 동시에 사용하여 증폭을 원하는 DNA의 특정 영역만을 in vitro에서 복제, 증폭하는 기술이다. 3단계를 거쳐 DNA를 복제하는데, 변성, 결합, 신장 과정을 반복하여 DNA를 증폭시킨다. 2. RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) RT-PCR은 유전자에서 만들어진 RNA에서 역전사효소를 이용하여 cDNA를 생성한 후, cDNA를 주형 가닥으로 PCR을 수행하여, 유전자의 RNA 발현...2025.01.18
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생물공정실험 예비보고서_RNA Extraction and Quantification2025.01.071. 유전자 발현과 조절 유전자 발현 경로는 전사와 번역으로 나뉘며, 전사 개시, 전사 후 가공, 번역 단계에서 조절될 수 있다. 전사 활성은 크로마틴 구조 변화, 전사인자 결합 등으로 조절되며, 전사 후에는 mRNA 가공, 번역에서는 mRNA 사용 속도 조절 등으로 이루어진다. 2. TRIzol을 이용한 RNA 추출 TRIzol 시약은 페놀-구아니딘 이소티오시아네이트로 구성되어 세포막을 파괴하고 RNase를 억제하여 RNA를 선택적으로 추출할 수 있다. 세포 용해액을 원심분리하면 RNA가 수용층에 존재하게 되며, 이후 isopro...2025.01.07
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Realtime PCR을 이용한 유전자 발현 분석)2025.01.231. RNA sequencing RNA sequencing은 DNA로부터 전사되는 모든 RNA 전사체의 염기서열을 차세대 분석기술을 사용하여 분석하는 기술이다. RNA sequencing을 위해서는 cDNA가 필요한데 cDNA를 준비하는 일반적 과정은 보통 RNA 추출>RNA 선택>cDNA 합성>라이브러리 제작으로 이루어진다. RNA 염기서열 분석 기술을 통해 alternative RNA splicing, 유전자의 발현량, 염기서열의 변이, gene fusion, single nucleotide polymorphism, SNP 등의...2025.01.23
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RT PCR (reverse transcription) / 100점 면역학실험 레포트 (원리, 시약, RNA 추출, cDNA 합성)2025.05.051. mRNA, transcription, translation 세포가 균의 침입을 인식하면 염증을 일으키는데, 이때 mRNA의 유무를 통해 세균 침입 여부를 알 수 있다. mRNA는 단백질 합성을 지시하는 전사체이며, 전사는 DNA를 주형으로 RNA를 합성하는 과정이고, 번역은 mRNA의 염기서열을 바탕으로 단백질을 합성하는 과정이다. 2. PCR, RT-PCR, real-time PCR PCR은 특정 DNA fragment를 증폭하는 기술이며, RT-PCR은 RNA를 DNA로 역전사하여 증폭하는 방법이다. Real-time PC...2025.05.05
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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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RNA 분리 및 cDNA 합성, 실시간 PCR을 이용한 개화시기 측정2025.11.121. RNA 분리 (RNA Isolation) 생명과학 실험에서 세포나 조직으로부터 RNA를 추출하는 기본적인 분자생물학 기법입니다. 이 과정은 세포를 용해시키고 단백질과 DNA를 제거하여 순수한 RNA를 얻는 것을 목표로 합니다. 추출된 RNA는 이후 역전사 반응이나 유전자 발현 분석 등 다양한 실험의 기초 재료로 사용됩니다. 2. cDNA 합성 (cDNA Construction) mRNA를 주형으로 하여 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용해 상보적 DNA(complementary DNA)를 합성하는 과정입...2025.11.12
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바이러스 RNA 추출 및 PCR 실험 보고서2025.11.141. RNA 추출 및 정제 바이러스 RNA 추출을 위해 HeLa 세포에 HRV1B를 감염시킨 후 세포를 용해하여 RNA를 분리했다. VB lysis buffer로 세포를 용해하고 AD buffer로 RNA에 염을 결합시켜 침전시킨다. VB column tube의 양전하 필터를 이용해 음전하를 띤 RNA를 분리하고, W1 buffer와 Wash buffer로 세척한 후 Nuclease-free water로 용출했다. 나노드랍을 사용하여 RNA 농도를 측정한 결과 대조군 227.8ng/ul, 실험군 195.2ng/ul로 측정되었다. 2...2025.11.14