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대장균 형질전환 실험보고서2024.08.241. 서론 1.1. 대장균의 특성과 중요성 대장균(Escherichia coli)은 그람음성의 간균이며, 포자 생성을 하지 않고 섭씨 37도에서 쉽게 자랄 수 있다. 대장균은 Theodor Esherich의 이름을 따서 발견되어 명명되었으며, 크기는 1-2 microns x 30-30 micron (1 micron = 0.001 mm)이다. 정상적인 인간의 장에는 감염되지 않는 대장균이 1kg 가량 들어 있는데, 이는 장내 세균총의 일부로 건강에 유익하다. 하지만 대장균 박테리아는 배설물과 함께 나와 식중독과 같은 질병을 일으킬 ...2024.08.24
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Gene cloning2024.09.301. 유전자 클로닝 1.1. 유전자 클로닝의 개요 유전자 클로닝이란 생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출한 후, 그 유전자를 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 기술이다. 다른 말로 유전자 클론화라고도 하며 특정 유전자의 대량 복제를 위해 쓰이는 중요한 DNA 재조합 기술이다. 이 기술은 기본적으로 수많은 종의 유전체와 종간 유전적 다양성을 연구하기 위해서 유전체의 DNA 조각, 혹은 서로 겹쳐져 있는 염기서열의 분석을 위해 활용된다. 또한 개별 유전자 수준에서 핵산의...2024.09.30
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유전자 클로닝2024.09.301. 실험 개요 1.1. 실험 배경 및 이론 이 실험은 개인의 상피세포 DNA를 분석하여 특정 유전자의 염기서열 차이를 확인하는 것을 목적으로 한다. 상피세포는 신체의 가장 바깥층을 이루는 조직으로, 상피세포에 존재하는 DNA를 분석하면 개인의 유전적 특성을 확인할 수 있다. 특히 이 실험에서는 주요 조직적합성복합체(MHC) 관련 유전자를 대상으로 한다. MHC 유전자는 인간백혈구항원(HLA)로도 알려져 있으며, 개인의 면역 반응과 질병 발병에 중요한 역할을 한다. MHC 유전자의 다형성을 분석하면 특정 질병과의 연관성을 확인...2024.09.30
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대장균 형질전환2024.09.131. 대장균의 형질전환 1.1. 서론 대장균이 가지고 있지 않은 외부 유전자를 인위적으로 삽입하여 대장균의 본래의 형질을 전환시키는 것을 의미한다. 유전자 조작을 통해 형질 전환 시킨 대장균은 유용한 물질을 대량 생산할 수 있다. 따라서 이는 생명공학에서 매우 중요한 기술이라고 할 수 있다. 우린 이 대장균을 이용하여 형질 전환을 시키는 것이다. 1.2. 형질전환의 원리 형질전환의 원리는 다음과 같다. 세균이 다른 세균의 DNA를 받아들여 자신의 염색체에 삽입하는 것을 의미하며, 이를 통해 세균은 유전적 다양성을 확보할 수 있다....2024.09.13
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형질전환 실험2024.11.171. 형질전환 1.1. 실험 이론 및 원리 1.1.1. 실험개요 형질전환이란 외부에서 만들어진 플라스미드를 플라스미드가 없는 원핵 세포 cell에 넣어 그 원핵 세포가 본래 성질과는 다른 새로운 유전형질을 나타내게 하여 삽입한 플라스미드를 대량으로 키우는 과정이다. 이 실험개요에 따르면 형질전환은 폐렴구균을 통해 DNA가 유전물질임을 PCR과 클로닝 등의 방법으로 증명했다. 예를 들어 인슐린의 경우 처음에는 돼지에게서 추출했지만 많은 수요에 비해 공급이 원활하지 못했고 깨끗하지 않을 수도 있다는 의견 때문에 중지되었다. 그 ...2024.11.17
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.171. 형질전환(Transformation) 1.1. 개념 및 원리 1.1.1. 형질전환의 정의 형질전환(transformation)이란 세포가 외부 DNA를 받아들여 자신이 갖고 있던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질에 변화가 나타나는 현상을 말한다. 이러한 형질전환은 세균에서 흔히 관찰되며, 인공적인 유전자 조작을 통해 이루어질 수도 있다. 어떤 세포가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 생리적 상태에 있는 것을 '유능(Competent)'하다고 하며 그러한 상태를 '유능성(Competence)'이라고 한다. 원래 자연스...2024.11.17
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특정 유전자를 선택하여 T-Vector에 삽입시키고 이를 E-Coli 내에 transformation 시켜 형질전환 박테리아를 선택적으로 배양2024.11.161. Transformation 조 1.1. 실험 목적 재조합된 DNA(eGFP DNA)를 Competent cell에 넣고, 배양된 Colony를 대조군과 비교함으로써 형질전환(Transformation)에 관하여 고찰해보는 것이 이 실험의 목적이다. 수용세포에 노출된 DNA가 흡수, 통합, 발현되는 과정을 나타내는 형질전환은 몇몇 박테리아 사이에서 자연적으로 일어나는 현상이다. 그러나 대장균을 포함한 다른 종들은 외부 DNA를 흡수할 능력이 없기 때문에 인공적인 방법으로 형질전환을 유도하게 된다. 이번 실험에서는 경쾌한 녹색...2024.11.16
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플라스미드 재조합2024.11.111. 플라스미드 재조합 이론과 방법 1.1. 목적 PCR로 증폭된 DNA를 플라스미드 벡터에 삽입을 한 후 competent cell을 형질전환을 시키는 것이 이 실험의 목적이다. 이를 통해 재조합 플라스미드를 대량으로 증폭하여 유전자 재조합 기술을 이용한 단백질 대량 생산 등의 응용을 목표로 하고 있다. 1.2. 실험 재료 TA Cloning에 사용되는 실험 재료는 다음과 같다. PCR product 5ul, Ligase 1ul, Ligase buffer 7.5ul, T-vector, DW 2.5ul, 원심분리기이다. Compe...2024.11.11
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플라스미드 추출2024.11.101. 플라스미드 DNA 추출 1.1. 플라스미드의 정의와 특성 플라스미드는 세포 내에서 세대를 통해 안정적으로 유지되고 전달되지만 염색체와는 독립적으로 존재하고 자율적으로 번식하는 유전자를 총칭하는 말이다. 진핵세포의 미토콘드리아나 엽록체 속에 들어 있는 DNA는 일반적으로 오르가넬 DNA라고 불리며 구별된다. 플라스미드는 세균의 생존에 필수적이지는 않지만 유전자의 존재로 인해 결합 전이(F 인자), 항생제에 대한 저항성(R 인자), 항균성의 합성(콜리신 인자)으로서의 기능을 한다. 또한 토양 박테리아에 존재하는 Ti 플라스미드와...2024.11.10
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TA cloning2024.10.091. 실험 소개 1.1. Gel Extraction Gel extraction 실험은 아가로스 전기영동을 통해 확인한 PCR product를 gel 상에서 분리 및 정제하는 것이 목적이다. DNA 분자는 아가로즈 겔 내에서 전기영동되어 분리된 후, 특정 DNA 밴드를 겔에서 잘라내어 추출하는 과정을 거치게 된다. 우선 젤 슬라이스에 FADF 버퍼를 넣고 vortexing하여 젤이 완전히 용해되도록 한다. 이때 0.8% 아가로스 겔을 사용했기 때문에 FADF 버퍼를 500㎕ 첨가했다. 이후 55℃에서 10분간 incubation...2024.10.09
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