"합성화학실험 칼럼크로마토그래피"의 검색결과 입니다.

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얇은 막 크로 column chromatography 생명과학 보고서 Fischer Esterification GC-Ms 바이오디젤 hplc 실험 크로마토그래피

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"합성화학실험 칼럼크로마토그래피" 검색결과 141-157 / 157건

[분리정제 실험]얇은 막 크로마토그래피(TLC)

. Purpose :이번실험은 얇은 막 크로마토그래피(TLC)법을 이용하여 화학적으로 구조가 비슷한 아미노산을 분리하고 표준물질과의 비교 분석하는 정성분석으로 각각의 아미노산(Arginine ... aluminium Sheets 20×20㎝, Silica gel 60 F254, merck사)이 판매되고 있어서 실험실에서 TLC용 판을 만들지 않는 경향이다.얇은 막 크로마토그래피(TLC ... 1. Theme : 얇은 막 크로마토그래피(TLC)2. Date : 06.3.163. Name & Coworker : 3조 윤현철, 홍문영, 정혜원, 김민수, 임대명4

Non-Ai HUMAN
| 리포트 | 8페이지 | 1,000원 | 등록일 2006.03.24

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[유기화학실험, 화학공학실험]알콜의케톤으로의산화와아미드로의전환

예비보고서실 험 4.알콜의 케톤으로의 산화와 아미드로의 전환제 출 일 :담당교수 :학 과 :학 번 :이 름 :목 차1.실험목적…………………2.이론…………………3.기구 및 시약…………………4.실험방법…………………5.참고문헌…………………1. 실험목적본 실험을 통해서 알코올의 케톤으로의 산화반응을 통해 카보닐화합물의 합성과 산화제의 선택에 대하여 실험을 통해 알아본다2. 이 론1) 알코올의 산화알콜은 산화되어 케톤이 되고 케톤은 또다시 산(acid)으로 산화된다. 반대로 산은 환원되어 케톤과 알콜을 생성한다. 먼저 첫 번째 반응에서 알콜의 OH와 연결되어 있는 탄소의 전자밀도는 케톤의 산소와 이중결합으로 연결되어 있는 탄소의 전자밀도 보다 높다. 왜냐하면 산소는 2개의 비공유 전자쌍을 가지고 있어 전기음성도가 탄소의 전기음성도 보다 크고 전자를 끌어당기는 힘이 커서 전자 밀도의 분포가 산소에 치우쳐 있게 된다. 또한 2중 결합은 단일 결합보다 더 강한 결합이고 공유하는 전자의 수가 더 많으므로 산소에 치우치는 전자 밀도는 더 크다고 할 수 있다. 결국 알콜에 있는 탄소의 전자 밀도는 산화반응을 거쳐서 케톤이 되어 감소되었다고 설명할 수 있다. 케톤에 산소와 이중결합을 하고 있는 탄소는 또한 카르복시산이 되면서 전자밀도가 더욱 감소하게 된다. 왜냐하면 전기음성도가 큰 산소와 또 하나의 결합을 하게되어 결국은 두 개의 산소에 의해서 전자가 산소 쪽으로 치우치게 되기 때문이다. 물론 이와 반대의 반응은 탄소의 전자밀도가 증가함으로 환원 반응이라고 할 수 있다.이러한 계념으로 설명할 때 유기화학에서의 산화반응은 탄소가 수소 이외의 다른 분자 (전기음성도가 큰, 예를들어 산소(O)나 할로겐(Cl, I, Br))에 의해서 치환되는 반응이라고 말할 수 있다. 또한 그 반대로 수소와 결합하는 반응은 환원반응이 될 것이다.2) 카르보닐 화합물의 산화-환원 관계카르보닐기의 가장 유용한 특성 중의 하나는 카르보닐기가 관여하는 풍부한 화학이다. 이 실험에서 카르보닐기를 아미드로 전환하는 두 단계 반응을 조사하게 되며, 여기에 제시되는 고리아미드는 시클로헥산온을 전환시킨 것으로, ε-카프로락탐이며 나일론-6라는 공업적 제품으로 사용되고 있다.수소음이온 시약은 카르보닐기를 환원시키는데 카르보닐기(carbonyl group) C=O 의 전자는 두 구성원자 사이에 고르게 분포되어 있지 않다. 산소가 탄소보다 더 큰 전기음성도를 가지기 때문에 카르보닐기의 탄소는 친전자성, 산소는 친핵성이다. 이러한 극성화는 전하가 분리된 공명형태로 나타낼 수 있다.카르보닐 탄소가 친전자성이므로, 친핵성(H-)는 수소음이온 시약(hydride reagent)에 의해 제공될 수 있다. 이러한 두 종류의 시약이 sodium borohydride(NaBH₄) 와 lithium aluminum hydride(LiAlH₄)이다. 이 두 화합물은 LiH 나 NaH 와 같은 더 간단한 유사체보다 일반적으로 유기용매에 더 잘 녹는 장점을 가지고 있다. 각 알칼리 금속 수소화물은 borane(BH₃) 나 alane(AlH₃)에 첨가하여 수소음이온 시약을 만들면, 중심원자는 팔 전자계를 갖는다. Methane이나 암모늄이온(NH₄+)와 같이,BH₄-나 AlH₄- 이온도 4개의 동등한 수소를 가지는 사면체이다.이러한 수소음이온 시약들의 화학은 수소원자의 수소음이온 성질에 의해 좌우된다. 카르보닐기의 환원은 탄소에 수소음이온, 산소에 양성자가 첨가되어 진행한다.비록 수소음이온 자체는 양성자성 용매에 의해 즉시 양성자 첨가가 일어나는 강력한 염기이지만, NaBH₄(BH₄-)에서와 같이 붕소에 결합되어 있으면 반응성이 상당히 낮아져 ethanol 과 같은 용매에서 사용된다. 알데히드나 케톤이 borohydride 에 노출되면 H- 가 카르보닐 탄소에 첨가되고, 동시에 용매에 의해 카르보닐 산소에 양성자 첨가가 일어난다. Ethoxide 부산물은 남아 있는 붕소화합물과 결합하여 ethoxyborohydride 가 된다.생성된 ethoxyborohydride는 원래 시약의 수소음이온 원자가 모두 소모될 때까지 세 분자의 카르보닐 화합물을 더 공격할 것이다. 결과적으로, 1당량의 borohydride는 4당량의 알데히드나 케톤을 알코올로 환원시킬 수 있다. 결국 붕소시약은 tetraethoxyborate로 변한다.3) IR(적외선 분광법)IR 복사선(IR radiation)은 진동에너지 준위들 사이와 회전 에너지 준위들 사이에서 전이현상을 발생시킨다. 회전에너지 준위들 사이의 전이현상은 기체상에서는 분명하지만 액체나 고체 상태에서의 스펙트럼에서는 각각의 회전 전이 현상으로부터 발생한 봉우리들이 분해되지 않아 넓은 띠를 보여준다. 진동에너지 준위들 사이에서의 전이현상에 의한 흡수 주파수로부터 분자 내의 작용기(functional groups)들을 식별할 수 있다. 적외선 분광법은 물질과 적외선간의 에너지 교환 현상을 이용한 측정법이다. 적외선 분광법은 유기물질이 mid-infrared 내에서 특징적인 흡수 파장을 나타내므로 이 유기물질의 구조를 알아내는데 효과적인데, 전처리 과정을 거치지 않고 여러 가지 혼합물 내에서 한 유기물질의 정량분석을 시행할 수 있다는 특징을 가지고 있다.분자진동이나 분자회전을 측정하는데는 두 가지의 가능한 방법이 있다. 즉 직접 빛의 흡수를 적외선 스펙트럼으로 측정하거나 또는 간접적으로 빛의 복사를 Raman 스펙트럼으로 측정한다.IR스펙트럼에서 흡수대의 위치는 흡수광의 파장단위(Wallenlange, wavelength) λ(μ 또는 ㎛)로 표시할 수 있다. 유기분자의 구조를 확인하는데 특히 유용한 흡수대는 λ = 2.5∼15㎛(10-3mm = 1㎛ = 104Å) 영역에 놓여 있다. 그러나 근래에는 파장과 역관계를 갖는 단위인 소위 파수 (Wallenzahl, wave number) ν(cm-1)를 대신 사용한다. ν수치는 1cm당 적외선이 나타내는 파수를 뜻한다. 파장을 파수로 환산하기 위하여 다음의 일반식을 사용하는 것이 좋다. 파수는 흡수된 빛의 진동수로써, 에너지 ΔE와 정비례하는 장점이 있다4) TLC (Thin layer chromatography)얇은층 크로마토그래피 (thin layer chromatography : TLC)에서는 정지상은 알루미늄판, 플라스틱 조각들 위에 가늘게 분쇄된 흡수 지지체로 된 얇은층을 제외하고는 종이 크로마토그래피와 매우 유사하다. 칼럼 크로마토그래피에 사용되는 어떤 고체도 적당한 결합체를 찾아낼 수 있다면 사용할 수 있다.① TLC의 정지상정지상은 가는 분말 (5～50μm 입자) 이고 흡착제, 이온 교환체, 분자체 또는 액체 막의 지지체가 될 수 있는 것들이다. 이 분말을 보통 결합제와 섞어서 물로 슬러리(slurry)를 만든다. 결합제로는 소석고, 황산칼슘, 폴리비닐 알코올 따위가 사용된다. 균일한 두께가 되도록 펴는 기구를 사용해서 슬러리를 판 위에 0.1～0.3mm 두께의 균일한 얇은 막으로 펴고 용매를 증발시킨다. 이 기구는 시판되고 있다. 말린 다음 110℃에서 수 시간 동안 가열하여 활성화시킨다. 여러 가지 얇은 판과 길고 가느다란 조각들이 시판되고 있다.가장 일반적으로 사용되는 정지상은 흡착제(adsorbent)들이고, 실리카겔, 알루미나, 분말 셀룰로오스 등이 가장 보편적이다. 실리카겔 입자는 그 표면에 히드록시기나 산소원자를 가지고 있으므로, 극성이 약한 화합물의 분리에 좋으나 실리카겔은 아미노산이나 당과 같은 극성이 높은 화합물의 분리에 적합하다. 규산 마그네슘, 규산칼슘, 활성탄 따위도 흡착제로 사용된다. 흡착제는 가끔 가열해서 활성화시키지 않고 사용되기도 한다. 그때는 흡착되어 있는 물이 정지상으로 작용한다.얇은 막상태의 액체 정지상을 액-액 분배 크로마토그래피용으로 만들 수 있다. 이 막은 보통 물이며, 칼럼 크로마토그래피와 같이 실리카겔이나 규조토와 같은 물질에 유지되어 있다. 실리카겔이나 규조토의 표면을 실라놀화 하여 무극성인 메틸기로 변화시키면 역상 TLC 에 이용될 수 있다.이온교환수지는 40～80μm 크기의 입자가 적당하며, 예컨대 약산형인 양이온 교환수지 Dowex-50W, 약염기형인 음이온 교환수지 Dowex-1 이 Na+, H+ 또는 Cl-형으로 각각 사용된다. 이온교환수지와 셀룰로오스를 6:1 의 비율로 물을 이용하여 슬러리를 만들면 0.2～0.3mm 의 층으로 펴기가 적당하다.크기별 배제용의 얇은층은 Sephadex Superfine으로 만들 수 있다. 겔을 물로 3일간 충분히 팽윤시킨 다음 판 위에 펼친다. 얇은 층은 마르지 않게 보존한다. 이와 같은 겔의 모세 작용은 다른 종류의 얇은 층에 비하여 매우 약하기 때문에 이동상은 1시간에 1～2cm 밖에 이동하지 않는다. 따라서 전개시간은 다른 정지상에서는 30분인 데 비하여 8～10시간 걸린다.② TLC의 이동상흡착 크로마토그래피에서는 용질의 용리능력은 그 극성의 순서로 증가한다 (예: 핵산 < 아세톤 < 알코올 < 물 ). 단일용매 또는 대부분 2～3 종류의 혼합용매가 사용된다. 혼합용매는 그것이 이동하면 얇은 층 위에서 연속적으로 조성이 변한다. 그 결과값은 용질의 반점이 얇은층 위에서 얼마나 멀리 움직이는가에 의존하게 된다.③ 크로마토그램의 전개전개는 일반적으로 빠르며 10분에서 1시간이면 끝나며, 재현성도 높다. TLC 판으로 현미경의 슬 라이드 유리를 사용하면 전개시간은 5분이면 끝난다. 이것은 최적조건을 찾아내기 위한 예비적 분리에 편리하다. 꼬리를 끄는 경향이 적으므로 예리하게 분리된다. 대표적으로 시료는 한 반점당 10～100μg(1% 용액의 1～10μL) 이고 지름은 2～5mm 이면 된다.5) IR(적외선 분광법)IR복사선(IR radiation)은 진동 에너지 준위들 사이와 회전 에너지 준위들 사이에서 전이 현상을 발생시킨다. 회전에너지 준위들 사이의 전이현상을 기체상에서는 분명하지만 액체나 고체 상태에서의 스펙트럼에서는 각각의 회전 전이 현상으로부터 발생한 봉우리들이 분해되지 않아 넓은 띠를 보여 준다. 진동에너지 준위들 사이에서의 전이현상에 대한 흡수 주파수로부터 분자내의 작용기 (funtional groups)들을 식별할 수 있다.

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| 리포트 | 10페이지 | 1,500원 | 등록일 2006.04.14

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[유기용제 실험] GC를 이용한 유기용제 정량분석

ReportⅠ. 실험 제목 : GC를 이용한 유기용제 정량분석Ⅱ. 실험 날짜 : 2004. 4. 29/ 5. 6Ⅲ. 실험 목적기체 크로마토그래피의 기본 원리를 이해하고, Spike sample를 조제하여 유해물질의검량선 작성 및 정량분석을 한다.Ⅳ. 서론 및 원리1. 크로마토그래피시료성분의 2쌍 사이의 분포 차이를 이용하여 다성분혼합물에서 각 성분을 분리?분석하는 방법. 흡착능?분배계수?휘발성?이온교환능의 차 등을 이용하여 혼합물을 분리?정제한다. 각종 분석기기와 병용하여 미량물질의 분석수단으로 이용되고 있다. 크로마토그래피의 형식은 여러 가지이지만 원리는 모두 같고 고정된 흡착제(고정상)의 한 끝에 시료를 넣고 용매나 기체를 이것에 연속적으로 흐르게 한다(이동상). 이동상과 고정상이 접하면서 이동하는 과정을 전개라 하고 이동상이 액체이면 전기제라 한다. 이온교환크로마토그래피에서는 이 전개를 용리(熔離)라 하고 사용하는 용매를 용리액이라 한다. 이동상은 시료를 함유하고 있는 고정상으로부터 시료를 녹여내는데, 용질이 여기를 천천히 지나가서 새로운 고정상에 닿으면, 두 상(相)에 대한 물리적?화학적 상호작용의 정도에 따라서 흡착 또는 분배된다. 고정상이 고체인 경우에는 흡착에 의하여, 액체인 경우에는 분배에 의한 것이 주된 상호작용인 것으로 추측된다. 따라서 고정상과 이동상의 계면에는 물질의 흡착과 용출(溶出)이 계속 되풀이되어 시료 속에 함유되어 있는 성분 중 흡착제와 친화성이 강한 성분일수록 용출되어 이동하는 비율이 적어지고 고정상 속에 머무는 비율이 커진다. 즉 친화성에 근소한 차가 있으면 고정상 속에서의 이동속도에 차이가 생겨 혼합물의 분리가 가능해진다. 혼합물의 분리에는 침전?여과?증류?승화?추출 및 그 밖에 물질의 화학적?물리적 성질의 차를 이용한 방법이 있는데, 크로마토그래피는 간단한 조작을 계속하는 것만으로 분리가 가능한 뛰어난 방법이다. 이용범위도 화학?생물학?약학?의학?농학?환경과학 등 물질을 다루는 과학의 모든 분야에 이르고 있다.2.크로마토그 원인이 다른 분배크로마토그래피를 이동상과 고정상이 액체인 액체-액체크로마토그래피의 형태로 도입하였다. 그 뒤 분리에 관하여 정량적으로 다루기가 쉬워지고, 크로마토그래피를 이론적으로 다루는 것이 가능하여졌으며 분리법으로서의 기초가 확립되었다. 두 사람은 이 업적으로 52년 노벨화학상을 수상하였다. 이 방법은 이동상이 기체인 경우에도 널리 적용되어 기체크로마토그래피로 발전하였다. 한편 액체-액체크로마토그래피는 뛰어난 분리법이기는 하지만 액체-액체 사이에서는 확산되어 평형에 도달하는 데에 상당한 시간이 걸린다는 본질적인 문제때문에 분리분석법으로는 실용이 어려운 점이 있었다. 그러나 최근 고성능 고정상의 개발, 고압송액(高壓送液) 펌프의 이용 등으로 기체크로마토그래피에 견줄만한 분리효율?분리시간으로 분리분석을 할 수 있게 되어 고속액체크로마토그래피로 발전하여 왔다.3. 크로마토그래피의 분류크로마토그래피에는 몇 가지의 분류법이 있다. 하나는 이동상과 고정상의 상태에 의한 분류로서 원리적으로는 실제로는 4가지의 크로마토그래피계(系)가 실용화되어 있다. 이 가운데 이동상으로 기체를 이용한 크로마토그래피 즉 기체-액체?기체-고체크로마토그래피를 통틀어서 기체크로마토그래피(gas chromatography;GC)라 하고, 이동상으로 액체를 이용한 액체-고체?액체-액체의 두 크로마토그래피를 액체크로마토그래피(liquid chromatography;LC)라 한다. 또 다른 분류법으로서 고정상으로 액체를 이용한 경우에는 주로 고정상과 이동상의 물질 분배력 차이로 분리가 일어나므로 이것을 분배크로마토그래피라 하고, 고정상이 고체인 경우에 물질의 분리가 주로 흡착력의 차이로 일어나므로 이것을 흡착크로마토그래피라 한다. 그리고 조작상의 형식에 따른 분류로서 칼럼(管)을 이용하는 넓은뜻의 칼럼크로마토그래피와 층상(層狀)의 것을 이용하는 층크로마토그래피로 나뉜다. 칼럼크로마토그래피는 보통 유리제의 관에 고정상이나 운반체를 채우고 이동상을 그 한 끝에서 유입하는 것으로 다량의 물질을 다루는 크로마토그래피에서는 고체 표면에 대한 물질의 흡착량이 온도?압력(또는 농도)에 의존한다. 또 물질의 분리는 용질(분리해야 할 물질)?고정상(흡착제)?이동상 등 3가지 요소로 결정된다. 따라서 시료인 용질의 성질에 따라서 이에 대응하는 고정상과 이동상을 선택하는 것이 중요하다. 예를 들면 극성이 큰 용질을 분리하는 데에는 활성도가 낮은 흡착제를 쓰고, 이동상이 액체일 경우 극성이 큰 용매를 쓰면 잘 분리할 수 있다. 흡착제로는 목적에 따라 흡착력이 큰 활성탄?활성알루미나?활성규산마그네슘?산화마그네슘 등과 흡착력이 약한 수크로오스?녹말?탄산나트륨 등이 사용되는데 대부분 목적에 따라 나누어 사용하고 있다. 이동상 액체로는 극성이 강한 피리딘?물?메탄올(메틸알코올)?에탄올(에틸알코올)?아세톤에서부터 극성이 약한 석유에테르?시클로헥산?사염화탄소?벤젠, 그 밖의 많은 용매가 이용되고 있다. 그리고 이동상이 기체인 기체크로마토그래피에서는 이용하는 기체를 운반체기체라 하는데 헬륨?질소 등과 같은 비활성기체가 주로 쓰인다. 흡착제로 이온교환수지를 이용하는 경우는 특히 이온교환크로마토그래피라 하며, 또 고정상으로 비활성의 다공성(多孔性) 충전제를 이용하여 이 구멍 속으로의 시료 성분 침투성의 정도에 따라 분자 크기의 차로 분리하는 방법을 분자체크로마토그래피(겔크로마토그래피)라 하여 구별하고 있다. 이 방법에서는 시료 성분 가운데 큰 분자는 구멍 속으로 들어가기 어려우므로 충전제와 충전제 사이를 지나서 빨리 유출되지만 작은 분자는 구멍 속으로 들어갔다 나왔다 하면서 유출하므로 늦어져, 결국 2개의 상이 분리된다. 이 경우 이동상 용매에 수계(水系) 용매를 이용하는 것을 겔여과크로마토그래피, 유기계(有機系) 용매를 쓰는 것을 겔침투크로마토그래피(GPC)라 하기도 한다.5. 분배계수?운반체고정상이 액체인 분배크로마토그래피에서는 액체에 대한 물질의 분배에서 분배의 법칙이 성립한다. 즉 혼합하지 않은 2개의 상 사이의 용질 농도를 라 하면 이 비(比) 는 농도와 관계없이 일정하다. 이것반적으로 고정상으로 극성이 있는 액체상을 이용하였을 때는 이동상에는 극성이 약한 액체를 이용한다. 반대로 고정상으로 비극성의 액체상을 이용하였을 때는 이동상으로는 극성액체를 이용하는데, 이 방법을 역상분배크로마토그래피라 한다. 고정상은 적당한 고체 운반체에 액체(액막)를 스며들게 하여 만든다. 예를 들면 크로마토그래피 중에서 가장 간단하고 값싸게 실험할 수 있는 종이크로마토그래피에서는 고정상을 보유하는 운반체는 거름종이이며 이 속에 포함되어 있는 물이 고정상이 된다. 이동상에는 물과 혼합되지 않는 유기용매가 사용되는데 모세관현상에 의한 삼투압으로 이동한다. 칼럼크로마토그래피에서는 운반체에 주로 실리카겔?규조토?유리?합성수지 가루 등을 쓰며, 여기에 물?폴리에틸렌글리콜?파라핀?실리콘유(油) 등을 측정대상이 되는 성분의 성질에 따라서 골라 쓴다. 한편 이 크로마토그래피는 제 2 차세계대전중 미국에서 핵분열 생성물 특히 방사성 희토류 원소의 분리에 이온교환수지를 사용하는 이온교환크로마토그래피가 획기적인 위력을 나타낸 뒤 무기이온?아미노산?단백질 등의 분리나 정제에 이용되는 방법이다.6. 검출?정량분리되어 나온 성분의 검출이나 정량에는 여러 가지 방법이 쓰이고 있다. 일반적으로 층크로마토그래피에서는 발색제를 분무하거나 자외선을 쬐어 형광을 관찰하거나 분광기에 의한 빛의 흡수?반사 등의 측정에 의한 것이 많다. 액체크로마토그래피에서는 분광광도계?시차굴절계?형광광도계가 일반적이고 질량분석계?적외선분광광도계?방사능검출기 등도 각각의 목적에 따라 쓰인다. 기체크로마토그래피에서는 기체의 종류에 따라 열전도가 다른 것을 이용한 열전도도 검출기, 운반체기체 속에 존재하는 시료 성분을 이온화하여 그 이온 전류값으로부터 구하는 수소염이온화검출기, 어느 특정성분에 대하여 대단히 높은 감도(感度)를 나타내는 선택적 검출기 등이 쓰이고 있다.Ⅴ. 실험기구 및 보조기구용량 플라스크(Volumetric flask) 10㎖, 용량피펫(Volumetric pipette) 1,4,5㎖비커, 바이얼제조한 용액에 1,2,4,8㎕씩을정확하게 취하여 활성탄관 100mg층에 정확하게 한번에 주입하고 마개를닫는다.⑤ Spike sample은 48시간 실온 냉장 보관한다..⑥ 농도를 계산한다.실험2) 혼합시료 분리 및 정성분석① CS2 1㎖를 용량 피펫을 사용하여 Vial에 넣는다.② 벤젠, 톨루엔, 오르쏘-크실렌 시약을 1,4,5㎕를 각각 취하여CS2가 첨가된 Vial에 넣는다.③ Vial의 시료를 5㎕ 취하여 GC에 주입한다.④ 피크를 보고 머름름 시간 성분을 확인한다.⑤ 실험보고서를 작성한다.◈ 실험시 주의사항- 시약병으로부터 용액을 취할 때 적당량을 비커에 옮긴 후 피펫으로사용하여 시약의 오염을 방지한다.- 시린지로 1,2,4,8㎕를 취할 때 기포가 생기지 않도록 주의한다.Ⅶ. 결 과1) Spike sample 제조【 DE1 】☞ Benzene1㎖×1/10×0.881×99/100×103 = 87.219☞ Toluene1㎖×4/10×0.865×99/100×103 = 344.27☞ O-Xylene1㎖×5/10×0.897×99/100×103 = 441.772【 DE2 】☞ Benzene2㎖×1/10×0.881×99/100×103 = 174.438☞ Toluene2㎖×4/10×0.865×99/100×103 = 688.540☞ O-Xylene2㎖×5/10×0.897×99/100×103 = 883.521【 DE3 】☞ Benzene4㎖×1/10×0.881×99/100×103 = 348.876☞ Toluene4㎖×4/10×0.865×99/100×103 = 1377.080☞ O-Xylene4㎖×5/10×0.897×99/100×103 = 1767.090【 DE4 】☞ Benzene8㎖×1/10×0.881×99/100×103 = 697.752☞ Toluene8㎖×4/10×0.865×99/100×103 = 2754.160☞ O-Xylene8㎖×5/10×0.897×99/100×103 = 3534.1802) 혼합시료 분리 및 정성분석BenzeneTolueneO-XyleneRT(m.09

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| 리포트 | 9페이지 | 1,000원 | 등록일 2004.12.03

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[기기분석]크로마토그래피

으나 실리카겔과는 달리 산성보다 알칼리성을 띤다. TLC기법을 사용한 다른 크로마토그래피 기법들이 제한적으로 사용되어 왔었다. 그래서 단백질 분리를 위한 겔-여과 TLC는 생화학 ... 크로마토그래피의 원리와 이론○ Sephadex column을 준비하다.? 고정상은 Sephadex G-100을 사용하고 이동상은 0.01N의 NaOH를 사용한다.? 고정상과 이동 ... 들의 혼합물을 분리하거나 정량분석 할 수 있다.크로마토그래피 기술의 이러한 특성 때문에 모르는 화합물의 여러 가지 성질에 관한 정보를 얻는데 자주 이용된다.* 컬럼과 TLC에 관해서

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| 리포트 | 9페이지 | 1,000원 | 등록일 2005.10.25

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가스크로마토그래피 gasChromatography

가 스 크 로 마 토 그 래 피 (Gas Chromatography)이 프레젠테이션에는 수행 항목을 만드는 청중 토론이 포함되어 있습니다. 프레젠테이션 하는 동안 PowerPoint를 사용하여 수행 항목을 확인합니다. 슬라이드 쇼에서 마우스 오른쪽 단추를 누릅니다. [회의록 만들기]를 선택합니다. [할 일] 탭을 선택합니다. 제안되는 대로 수행 항목을 입력합니다. 이 상자를 없애려면 [확인]을 누릅니다. 프레젠테이션 끝에 요점을 입력한 수행 항목 슬라이드를 자동으로 만들어 줍니다.Gas Chromatography의 원리시료를 기화시켜 고정상에 채워져 있는 분리관 위에 주입하고 비활성 기체 이동상의 흐름을 따라 분리되면서 고정상과 이동상 사이에 물리적,화학적 작용에 의해 분배되면서 분리.Gas Chromatography의 구성요소운반기체의 조건 ① 높은 순도 ② 비 활 성 ③ 큰 분자량 ④ 저렴한 가격, 무독성 ⑤ 검출기에 적합한 기체운반기체 (Carrier Gas)운반기체(Carrier Gas)- 종류 : H2 , He, N2, Ar ⇒ 검출기의 종류에 따라 다름. - 순도는 99.995% 이상 (단, ECS는 99.9995%이상, Five-Nine) - 대체로 고압 기체 실린더가 운반 기체의 공급원이 되며, 균일한 압력을 유지하여 일정한 속도의 기체 흐름을 얻기 위해 압력 조정 장치(pressure regulator)가 부착됨. - 칼럼의 효율은 적당한 운반 기체의 선택과 사용되는 칼럼의 지름 등에 따라 다른 흐름 속도에 의존. 즉 실험 조건과 용질이 같은 경우에도 운반기체의 종류에 따라 최적 흐름 속도가 달라져 분리능에 영향을 주게 됨.불 꽃 광 형 검 출 기 ( F P D )전 자 포 획 형 검 출 기 ( E C D )알칼리 열이온화 검 출 기 ( F T D )수소염 이온화 검 출 기 ( F I D )열 전 도 도 검 출 기 ( T C D )검 출 기인 또는 유황화합물감도 우수N2유기할로겐화합물, 니트로 화합물 및 유기금속 화합물최고 감도 최고의 동적 범에서 분리 관에서 이동하도록 함. ○ 시료 도입부의 온도 : 시료성분의 B.P + 20℃ 정도. ○ 시료량 : 분리관의 크기와 액체상의 양에 따라 다름. - 기체시료 : gastight syringe나 sampling valve를 이용하여 주입. - 액체시료 : micro syringe를 사용. - 일반적인 분리관에는 1㎕ - 10㎕의 시료를 주입. 모세관 컬럼(Capillary column)의 경우는 1-3㎕ 정도의 시료를 주입.시료주입부의 구성주입부의 구성 : 가열기와 온도 감지기 가 내장된 금속 블록(metal block)으로 구성. - 앞쪽에는 셉텀 지지대(septum holder) 가 있고 뒤쪽은 분리관과 연결. - 운반기체를 미리 가열하기 위한 모세관 코일, 시료를 기화시켜서 운반 기체의 흐름에 실어주는 기화실, 그리고 분리 관 크기에 따라 적절히 사용할 수 있는 어댑터(adapter)나 연결장치(fitting)등 으로 구성. - 그 외 다른 부대장치가 있는 경우도 있음. 즉, 주사기 보호대, 세척을 용이하게 하도록 장착하였다가 다시 빼낼 수 있는 유리 또는 금속 라이너(liner), 고체 잔류물을 위한 트랩(trap)등이 있다.① 온 도 (Temperature) ② 셉 텀 (Septum) ③ 청 결 도 (Cleanliness)주입부에서 발생될 수 있는 세가지 문제점분 리 관 (Column)혼합물을 단일 성분으로 분리하는 부분. 분석에 필요한 column의 선택은 시료 중의 분석 하고자 하는 성분의 화학적 성질(polarity) 과 관계가 있음. 일반적으로 분리관은 고정상이 충전되어 있는 관 전체를 가리키며, GLC와 같이 고정상이 액체인 경우는 고정상을 지지하는 담체까지를 의미.분리관의 재질스테인레스 스틸 (Staniless Steel): 대부분의 기체 크로마토그래프용 분리관으로 사용 유리 (Glass): 살충제나 스테로이드와 같은 불안정한 물질을 분석 알루미늄 (Aluminium): 빈번히 이용되나 산화 문제를 초래할 수 있음 구리 (Copper 작아야 한다.GSC (기체-고체 크로마토그래피) 고정상을 다공성 고체 담체를 사용하여 기체-고체 사이에서 시료의 성분들이 평형을 이루어 분리. 분리관내 충진물은 고체로 주로 흡착제(Adsorbents)를 사용. [흡착제, 합성제올라이트(zeolite), 분자체(molecular sieve), 다공성 중합체 (porous polymers)등] - 주로 휘발성이 강한 물질들의 분석에 이용.분리 메커니즘에 따른 분류GLC (기체-액체 크로마토그래피) 비활성의 고체인 담체에 엷은 막으로 입혀진 액체를 고정상으로 사용하여 기체-액체 사이에서 시료의 성분들이 평형을 이루어 분리 충진분리관 (Packed Column): 보통 고체 지지체에 일정한 퍼센터로 액상을 코팅한 고정상을 사용 모세분리관(Capillary Column): 튜브의 내부표면에 액상을 입혀 고정상으로 사용분리관이 갖추어야 할 조건분리관의 튜빙은 시료분리를 일으키는 재료를 담은 용기로서, 그리고 운반기체의 흐름을 위한 안내자로서의 역할만을 하는 것이 바람직. 분리 그 자체에는 전혀 영향을 미치지 않아야 함. 가능한 비활성이여야 함. 충전컬럼은 유리 또는 금속 재질을 사용. - 가장 많이 사용되는 튜빙 재질의 성능면에서 요구되는 조건 E : 우수(execellent), G : 양호(good), P : 불량(poor), X : 특별한 상황에서는 나쁨EEEEE불침투성 정도PEEEE온도범위EEGNOE구부릴 수 있는 정도EG (X)G (X)EG비활성 정도테플론구리알루미늄유리강철분리관의 분리능- 여러 개의 피크와 피크 사이를 분리, 식별하는 컬럼의 능력을 의미.고정상(Stationary Phase)칼럼과 이동상 기체(Carrier Gas)실제 컬럼 내에서 분리가 이루어지는 곳. 시료를 이동시키는 역할을 하는 것이 이동상 기체(Carrier Gas). 모세관 컬럼을 선택할 때에 가장 먼저 고려해야 할 것은 PLOT 컬럼을 사용할 것인가 아닌가를 결정하는 것. - 일반적인 PLOT 컬럼의 응용분석 3가지C1-C10 탄화 분리 과정에서 컬럼온도가 계속적, 또는 단계적으로 증가하는 온도 프로그램법을 이용하는 것이 요구됨. 일반적으로 최적의 분리는 낮은 온도에서 이루어짐.검출기(Detector)운반기체가 통과하는 장치. 흐르는 기체의 조성이 변화할 때 전기적 신호로써 응답하게 됨.그림. 각종 검출기의 성능검출기의 특성1) 감응 (Response) 감응이란 시료에 의하여 생겨나는 신호. 이상적으로는 이 응답이 시료의 양에 의해서만 달라지는 것이나, 실제 분석에 있어서는 시료의 성질에 따라서 상당히 변화. 2) 민감도 (Sensitivity) 여러 시료의 크기에 따라 감응이 결정되고 이 데이터를 시료 무게에 따라 플롯(plot)하여 나타나는 직선의 기울기가 곧 민감도.3) 선택성(Selectivity) 열전도도 검출기는 모든 것에 반응하는 보편적인 검출기. 이에 비하여 불꽃 이온화 검출 기는 선택적이어서 연소되었을 때 이온을 방출하는 물질에만 반응. 이 검출기는 물, 질소, 이산화탄소 및 기타 많은 성분들을 분석하지 않음. 따라서 선택성은 매우 바람직한 성질 이 될 수 있다. 4) 직선성(Linearity) 우리는 표준물질 몇 가지만을 주입하여 그 결과로부터 검량선을 작성하고 하나의 검량선 만을 적용하여 해당물질을 농도에 상관없이 모두 분석하기를 원함. 어떤 검출기는 이것 이 종종 가능하지만 검출기의 종류나 또는 농도 수준에 따라 심각한 정량의 오차가 유발 될 수 있음.검출기의 종류(1) 열전도도 검출기(TCD : Thermal Conductivity Detector) 원 리 - 필라멘트와 같은 가열된 물질의 열의 손실은 주위에 있는 기체의 조성에 따라 달라진다는 원리에 근거를 둔 검출기. - 운반가스와 '운반가스+시료성분'의 열전도도 차이를 측정. - 금속 필라멘트 또는 전기 저항체를 검출 소자로 하여 금속판 안에 들어있는 본체와 여기에 안정 된 직류 전기를 공급하는 전원 회로, 전류 조절 부, 신호검출 전기 회로, 신호 감쇄부 등으로 구성 특 징 - 모든 기체와 증기에 응답, 무 온도가 달라서 응답이 달라짐. - H2/Air에 의하여 형성되는 Flame에서 시료가 태워지 면서 전하를 띤 이온이 만들어지고, 전하를 띤 이온의 농도에 비례하여 전류의 흐름에 변화가 생김. - 감도: 대부분의 화합물에 대하여 TCD의 약 10배 높은 감도를 나타냄. - 검출한계: 저탄소 탄화수소 – 5ng/sec 고탄소 유기물(액체나 기체) –10pg까지 검출. - 검출기 조작 온도 : 100~420℃ - 유기물의 분석에 안정성, 고감도. - 운반기체로 주로 질소 사용.(3) 전자포획형 검출기(ECD : Electron Capture Detector) 원 리 - 양으로 이온화되어 생긴 전류를 측정하는 것이 아니라 일정하게 유지되는 전류가 외부 의 시료 유입에 의해 감소되는 것을 측정. - 방사선 동위원소(63Ni, 3H 등)로부터 방출되는 β선이 운반 가스를 전리하여 미소 전류 를 흘려 보낼 때 시료 중의 할로겐이나 산소와 같이 전자 포획력이 강한 화합물에 의하 여 전자가 포획되어 전류가 감소하는 것을 이용하는 방법으로 유기 할로겐 화합물, 니 트로 화합물 및 유기 금속 화합물을 선택적으로 검출할 수 있음. 특 징 - 오늘날에는 350℃까지 가열될 수 있고, 검출기의 오염을 감소시키며, 해리 전자 포착을 하는 화합물에 대하여 감도가 큰 ⁶³Ni 사용. - ECD의 선택성 : alkyl halides, conjugated carbonyls, nitrites, nitrates, 유기금속 화합물 에 대해 상당히 감도가 높음. - 유기 염소제의 농약분석이나 PCB(Polychlorinated biphenyls) 등의 환경 오염 시료의 분석에 많이 사용되고 있고, 어떤 농약의 경우에는 10-12g이하의 농도도 측정이 가능. - 탄화수소, 알코올, 케톤 등에는 감도가 낮음.Gas Chromatography의 응용분야가스 크로마토그래피는 휘발성 물질의 분석 시 이용 - 불휘발성 물질은 산화, 아실화, 알킬화 등으로 휘발 성 물질로 변화하는데 이러한 원리는 알콜, 에스테w}

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| 리포트 | 28페이지 | 2,000원 | 등록일 2006.10.31

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가스크로마토그래피(GC) 결과레포트 + 벤젠분석실험 예비레포트

제출일 : 2007년 월 일기기분석실험 결과레포트(GC) 및예비레포트(벤젠분석실험)조학년학번이름※ GC 결과레포트1. 원리가스크로마토그래피법은 기체시료 또는 액체시료를 급속 기화 ... 합쳐서 8자리로만 표시된다. comment에는 우리가 실험한 조건을 적어준다.※ 벤젠분석 예비레포트1. 목적용제의 증발 또는 화학반응에 의해 굴뚝 등에서 배출되는 배출가스 중의 벤젠 ... 을 분석하는 방법에 관하여 규정한다.2. 분석방법의 종류(1) 가스 크로마토그래피(GC)시료를 흡착관 또는 테들라 벽에 채취하고, 흡착관은 열탈착장치에 직접 연결하거나 흡착제

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| 리포트 | 14페이지 | 2,000원 | 등록일 2007.10.05

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이온교환 사전보고서

하여 최초의 이온교환수지 합성1939년, Olof Samuelson(스웨덴) : 이온교환 크로마토그래피법 이용1940년, acidity와 basicity가 증가된 고분자 이용2차 대전 ... 을 통해서 술폰산이나 카르복실산으로 처리하 여 합성한 이온교환수지로 이는 물리적이나 화학적으로 불안정하였다.19C 중반, H.S.Thompson, J.T.Way(영국) : 토양 ... , 메톡시기와 같은 전자공여기를 도입하면 열안정성은 저하된다.?이온교환수지의 합성이온교환수지의 합성은 이온교환수지의 물리적, 화학적 구조에 따라 다음과 같이 두 가지로 나눌 수 있

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| 리포트 | 21페이지 | 1,500원 | 등록일 2007.05.24

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[생물실험] 식물세포(광합성)의 색소분리

들은 각기 특정한 파장의 빛을 흡수한다. 광합성 색소들은 화학 구조에서 볼 수 있듯이 대부분 지용성 분자들로써 여러 가지 유기용매에 녹는 정도가 다양하다.6. 색소 분리 실험가종 ... 가 존재한다.크로마토그래피는 이동상의 상태에 따로 보통 GC와 LC로 크게 나누고, 정지상의 상태와 종류에 따라 세분할 수 있는데 정지상을 칼럼에 넣고 용리시키는 칼럼법과 정지상을 얇은 판위에 묻히거나 거름종이를 사용하는 판법등이 잇다. ... 1. 광합성광합성은 녹색식물이 빛에너지를 이용하여 CO2와 물로부터 유기화합물을 생성하는 과정이라고 간략하게 정의할 수 있을 것이다. 이 과정은 녹색식물에 의한 빛 에너지의 화학

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| 리포트 | 4페이지 | 1,000원 | 등록일 2003.03.19

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[크로마토그래피] 크로마토그래피

되는데 모세관현상에 의한 삼투압으로 이동한다.칼럼크로마토그래피에서는 운반체에 주로 실리카겔·규조토·유리·합성수지 가루 등을 쓰며, 여기에 물·폴리에틸렌글리콜·파라핀·실리콘유(油) 등 ... 크로마토그래피를 발견하였는데, 그들은 1952년 이 업적으로 노벨화학상을 받았다. 현재는 흡착제로서 이온교환수지 등을 사용하기도 하며, 아미노산 ·당 ·펩티드 ·항생물질 ·무기 ... 는 시료의 물리, 화학적 성질을 측정에 이용한다.아래 그림은 가상의 세 가지 성분에 대한 크로마토그램을 나타낸 것이다.?크로마토그래피의 분류크로마토그래피는 주로 이동상과 정지상에 따라

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| 리포트 | 22페이지 | 1,500원 | 등록일 2003.11.22

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[화학] 크로마토그래피 보고서

는 것이 액체인가 기체인가에 의해 액체 크로마토그래피와 가스 크로마토그래피로 대별된다. 그 어느 것이라도 유기 화학을 위시해 생화학, 의학 등의 분야에서 없어서는 안되는 기술로 되 ... 물질)가 이끄는 연구팀은 전통적인 크로마토그래피 관(column) 대신 전기화학적 쎌(cell)을 사용하여 물질을 분리한다. 그 결과 관 내부의 고체상 담체를 사용 후 교체할 필요 ... 하는데도 매우 효과적인 분석방법이 될 수 있다.단백질을 재원형화하는 크로마토그래피 칼럼유전자 재조합 기술은 유용한 단백질을 대량으로 생산할 수 있는 방법을 제공해 준다. 특히 대장

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| 리포트 | 10페이지 | 1,000원 | 등록일 2002.11.29

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가스크로마토그래피

크로마토그래프{그림 크로마토그램의 예(head space에 의한 국화 의 생화)크로마토그래피의 원리는 이동상과 고정상이 필요하다. GC에서의 이동상은 캐리어가스이며, 고정상은 칼럼내벽 ... 에 의해 미지 시료의 농도를 분석한다. 그리고 TCD분석 장치의 조작방법에 대해 알아보고자 한다.B. 가스크로마토 그래피의 이론적 고찰가스크로마토그래피[GC(Gas ... Chromatograph)]란 이동상으로서 가스를 사용하는 크로마토그래피의 장치이다. 가솔린등과 같은 다성분의 혼합체의 분석을 목적으로 하며, 기지의 표준물질과의 비교로 물질의 동정이 가능

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| 리포트 | 23페이지 | 1,000원 | 등록일 2003.10.13

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[작물생리학] 엽록체의 추출및 정량 실험보고서

isocratic분리이다.2. 엽록체 분리식물의 광합성 세포의 엽록체 내에는 chlprpphyll계와 carotenoid계 색소가 들어 있다. 이들의 화학구조 및 광합성에서의 기능은 실험 c ... 으면, 이 두 액체상 사이에서의 분배의 차이에 의해서 각 성분이 여러 장소로 나뉘어 고정되는 분배 크로마토그래피를 발견하였는데, 그들은 1952년 이 업적으로 노벨화학상을 받 ... 있다.엽록소 함량을 측정하는 또 다른 방법은 박층크로마토그래피로 a와b를 각각 분리하여 용출한 다음 스펙트럼을 측정한다. 보다 간단한 방법은 HPLC를 이용하는 것인데 자동

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| 리포트 | 7페이지 | 1,000원 | 등록일 2003.05.08

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[화학측정실험] Gas Chromatography

에서의 용질의 이동속도를 나타냄K : 분배계수 VS : 정지상의 부피 VM : 이동상의 부피선택도 (selectivity)GC-Chromatography크로마토그래피의 분리정도를 나타냄 ... 에 영향을 주는 요인 ① 컬럼 제작 방법 ② N값 측정을 위해 선택한 시료의 물리․화학적 특성 ③ 이동상인 용매의 흐름속도 ④ 분리 온도 ⑤ 시료 주입 방법H를 줄이기 위한 실험 ... 화합물의 분리 및 분석 법으로 확대 화학 공업에서의 분석 및 품질 관리 업무 미량 분석, 유기 합성, 의약품 및 생물 화학 물질의 분석 및 대사 연구 환경 오염 물질의 분석

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| 리포트 | 38페이지 | 1,000원 | 등록일 2005.01.21

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[공업화학] 환원반응

알콜을 제조하고 목적물을 분리 정제한다.5. 실험 기구 및 장치● 각종 초자: 플라스크, 비이커, 피펫, 분액 깔대기, 크로마토그래피용 컬 럼 등...● 분석 기기: TLC, UV ... 있다. 이 막은 보통 물이며, 칼럼 크로마토그래피와 같이 실리카겔이나 규조토와 같은 물질에 유지되어 있다. 실리카겔이나 규조토의 표면을 실라놀화 하여 무극성인 메틸기로 변화 ... 1. 실험 일자: 2001년 12월 5일 수요일2. 실험 제목: 환원(Reduction) 반응3. 실험 배경유기 합성 공업에서 매우 중요한 환원 반응을 통해서 유기 실험의 기초

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| 리포트 | 14페이지 | 1,000원 | 등록일 2002.05.26

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[생명공학실험] 키틴조직에서 키틴분해효소의 분리

Ⅰ. 서 론1) 키틴.키토산이란?키틴은 새우.게등 갑각류, 투구풍뎅이.귀뚜라미.여치 등 곤충류, 기타 균류의 세포벽 등에 단백질과의 복합체로서 함유되어 있는 다당류로, N-Acetylglucosamine이 β-(1→4) Gluco side 결합으로 연결된 구조를 가지고 있다.한편, 키토산은, 키틴을 염알칼리로 처리함에 따라서 얻을 수 있는 키틴의 탈Acetyl체로, D-Glucosamine이 β-(1→4) 결합한 구조를 갖는다 (그림 1)그림 1. Chemical structures of cellulose, chitin, chitosanCH2OH CH2OH CH2OHH O H O H OOH H O OH H O OH H On n nH OH H NHCOCH3 H NH2Cellulose Chitin Chitosan게, 새우와 같은 갑각류의 껍질은 크게 나누면 단백질, 칼슘, 키틴질의 3가지 성분으로 구성되어있는데, 이 껍질로부터 일련의 처리공정을 거쳐 키틴을 추출한다. 게껍질등을 염산 및 가성소다로 처리하여, 탄산칼슘, 단백질, 기타 미량성분을 제거한 것을 키틴이라 하고, 이 키틴을 더욱더 탈아세틸화 처리하여 추출한 것이 키토산이다. 그러나 일반적으로 제조되는 키토산에는 잔류된 키틴이 5∼25% 정도 함유되어있는 이유로 키토산을 키틴 키토산이라 부르기도 한다. 키틴 키토산은 백색∼담황색∼담적색의 물질로 Cellulose와 매우 유사한 구조로서, 분자내에 존재하는 아미노기에 의한 강력한 분자간 결합력을 가진 안정한 천연고분자이다. 화학적 구조로 보면 키틴이나 키토산은 셀룰로오스와 비교할 때 많은 차이점을 볼 수 있다. 즉 키틴이나 키토산은 셀룰로오스의 -OH기 1개가 -NHCOCH3기나 -NH2기로 변화된 것에 불과하나 셀룰로오스와 비교할 때 많은 차이점을 보여준다.* 키틴 키토산의 화학명과 성상키틴(Chitin) → β-(1,4)-Poly-N-Acetyl-D-Glucosamine (C8H13NO5)n키토산(Chitosan) → β-(1,4)-Poly-D-Glucos양상을 보여주고 있으며, 인체적 합성측면에서 가장 높은 효율을 보여주고 있다. 옛날부터 가정 상비약으로 오징어 뼈를 건조하여 가루로 분쇄하여 보관하였다가 상처부위에 바르던 습관은 바로 Chitosan의 약리작용을 경험적으로 터득하고 있었던 것으로 판단된다. Chitosan의 사용에서 Chitosan의 탈아세틸화도(Degree of Deacetylation)에 따라서 Chitosan의 고유한 성질이 발현되나 이 탈아세틸화도의 중요성이 제대로 인식되지 못하고있다.* 탈아세틸화도(Degree of Deacetylation) → Chitin에서 Chitosan으로의 변환 정도갑각으로부터 얻어진 Chitin은 40%이상의 강한 알칼리용액 속에서 처리함으로써 Chitin의 NHCOCH₃기를 NH₂기로 변환시켜서 Chitosan을 제조할 수 있다. 알칼리처리에 의해서 NHCOCH₃기의 NH₂기로의 변환율을 탈아세틸화도 라고 정의하는데, 아직까지 탈아세틸화도가 100%에 달하는 Chitosan의 제조에 성공한 예는 아직 없다 한다.탈아세틸화 반응에서 가장 중요한 사실은 지극히 강한 알칼리용액속에서 Chitin이 처리되기 때문에 Chitin의 심각한 상해가 수반되어 세심한 기술적인 Know-How가 적용되지 않으면 Chitin의 분자쇄가 급속히 절단되어 변색이 수반된 분자량이 낮은 Chitosan밖에 얻을 수 없다. 분자량이높고 고백색도의 고순도 Chitosan을 얻기위해서는 Chitosan제조시 알칼리의 과격한 작용을 저지시켜줄 수 있는 방법이 요구된다. 아무리 강한 알칼리 조건이 부여된다할지라도 100%의 탈아세틸도를 갖는 Chitosan은 아직까지 얻어질 수 없으며 목적에 따라서 98∼99%까지도 제조를 하고있으나 일반적인 경우 탈아세틸화도가 80∼90%정도이다.4) 키토산의 물질 특성 키틴및키토산은 무미무취의 천연 고분자 다당체이며, 섭취후 약간 떫은맛의 여운이 느껴진지며 키틴과 키토산 모두 천연 식품첨가물로 사용되고 있으나, 건강식품용도로 주로 사용되는것은 키토산이나될 수 있는 기의 pKa로 pH의 효과를 알아볼 수 있다. 예를 들어 어떤 화합물, 즉 강산염에 서 pH는 상대적으로 덜 중요한 반면 아미노산 또는 단백질같이 잠재적으로 음이온과 양이온기를 가지는 분자에서는 pH의 변화가 극성 변화의 정도에 따라 순전하를 어느 정도 변화시킬 수 있다. 이러한 특성은 단백질과 유사한 혼합물들이 단지 pH 이동으로 순전하가 변함으로써 음 이온이나 양이온 교환체로 분류되므로 중요하다. 단백질의 순전하가 0이 되는 pH, 즉 isoelectric point (pI)를 안다면 이는 흡착이 일어나는 pH 조건을 선택하는데 있어서 시작점으로 사용할 수 있다.교환체와 용질분자(이온)사이에 필요한 전하량 조건이 이루어지면 흡착이 일어나며 그 이후에 탈착에 대하여 논할 수 있다. 탈착은 교환체로부터 하전된 용질 분자를 대치하기 위해 이동상에 경쟁적 이온을 추가함으로써 이루어진다. 어떤 경우에는 이온 교환이 하전된 분자를 용액으로부터 분리하는 기법으로 사용될 수 있으며 이런 경우 탈착 과정은 선택적일 필요가 없고 고농도의 염 이온을 사용할 수도 있다. 그러나 몇몇 하전된 화합물, 예를 들면 아미노산 분석 같은 경우는 이온 교환을 사용하는 것이 보다 일반적이다. 이런 경우, 각 이온들이 다른 속도로 탈착 분리되므로 선택적 탈착이 요구된다. 이 효과를 그림B에서 이온 교환체에 흡착된 세 가지 화합물에 대하여 나타내었다. 이 세 가지 화합물은 교환체에 대한 다른 친화력을 가지 고 있어서 염 농도의 적절한 선택으로 분리될 수 있다. 염 농도가 A인 경우 세 가지 모두 어느 정도 탈착되지 않으므로 칼럼에 남아있다. 반면 염 농도 C에서는 사실상 모두 흡착 제거되어 재빨리 용리 되지만 분리는 일어나지 않는다. 중간 농도 B에서는 흡착 속도가 달라 효과적인 분리가 된다.하전된 분자들은 이동상의 pH를 바꾸어 교환체로부터 용리될 수 있으며 전하의 이동과 관계 있는 용질 분자의 ratio 또는 이온 교환체 내의 이온 교환 자리가 감소한다 이러한 변화는 차례로 머이 때 buffer의 pH가 중요한데 이는 protein의 charge의 상태가 pH에 따라 변할 수 있기 때문이다. 우린 실험에서 pro tein이 가장 잘 용출된다고 조사된 pH 7.5의 buffer를 만들어 실험시 사용했다.우리 조의 결과를 보면 Anion상에서는 중성이나 (+)charge를 띄는 protein이 많았고, 작은 (-)charge를 띄는 protein들도 어느 정도 용출된 것을 알 수 있다. Cation상에서는 (-)charge를 띄는 protein들이 거의 대부분이었으며 용출시키려던 (+)charge를 띄는 protein은 거의 찾아볼 수 없었다. 분명 같은 sample을 가지고 실험했음에도 불구하고 Anion에서 용출되지 못한 protein들이 Cation에서 잡혀서 보일거란 예상은 빗나갔다. 사실 나도 이점이 젤 궁금하게 생각되었는데 어떤 실험과정이나 시료 또는 buffer의 문제점보다는 기계상의 washing의 상태나 binding시켜주는 시간 등에서 문제가 있었을 거라고 생각했다.* 서론에서도 기술했지만 키틴과 키토산의 경우는 음전하(－)를띠는 기존의 대부분의 식물섬유(또는식이섬유)와 달리, 용해상태에서 양전하(+)를 띄는 지구상 유일의 천연동물성 식물 섬유라는 특이한 구조를 가지고있다고 한다. (조교님 정확한 이유를 알고 싶습니다~)☞ 4주차 실험 → HIC (hydrophobic interaction chromatography)1) 소수성 상호반응 크로마토그래피 (hydrophobic interaction chromatography)물속에 소수성 물질이 들어오면 서로 뭉치려는 현상을 볼 수 있다. 예를 들면 헥세인(hexane) 2 분자가 물에 들어오면 자발적으로 서로 모이는 것을 볼 수 있다. 이러한 현상은 열역학적으로 자발적으로 일어나는 소수성 상호반응이다. 소수성 상호반응 크로마토그래피는 소수성 기능기를 갖는 지지체(matrix)와 어떤 분자간의 소수성 상호작용을 이용하여 분리하는 방법이다. 지지체는 친수성(hydrophi수성기를 가지고 있다고 설명할 수 있다. (데이타 값의 신뢰성 여부에 따라 결과는 다를 수 있다고 생각한다)☞ 5주차 실험 - protein 정량 (by Lorry and Folin method at mg level)1) Lowry-Folin method의 원리FolinCiocalteu시험법：텅스텐산나트륨, 몰리브덴산나트륨, 인산 등으로 되어 있는 단백질 정량시약（페놀시약이라 함）이 단백질중의 tyrosine, tryptophan, cysteine의 각 잔기와 반응해서 청남색을 나타낸다. 다시 감도를 높이기 위해서 이것과 Biuret반응을 조합한 Lowry법이 실제로 널리 쓰이고 있다. 또한 Biuret반응 자체도 정량의 목적으로 자주 쓰이는 방법이다. [4]*왜 570m에서 측정할까?--청남색의 흡수파장이 570mm에서 가장 잘 측정된다.*BSA(bovine servime albumin)--일반적으로 단백질 정량에 쓰이는 표준물질--standard curve를 잡을 수 있다.2) 실험방법먼저 BSA(1mg/1ml)용액과 물을 섞어 0 20% 40% 60% 80% 100%의 standard sample을 만든 후 O.D를 측정하여 standard curve를 얻는다. 다음 chromatography를 통해서 bind, nbind로 분리된 각각 2개의 sample을 원액과 10배 희석한 2가지 경우로 만들었다. 모든 시약을 정확히 가해주고 voltexing한 뒤에 O.D를 측정하여 standard curv e에 대입하여 정량값을 얻어내었다< Lowry - Folin 법에 의한 Preotein의 정량 >시료분리된 단백질sample원액10배 희석O.D 값정량값(㎎/㎖)O.D 값정량값(㎎/㎖)Anionbind0.0880.17030.0210.0406unbind0.1210.23420.0390.0755Cationbind0.0660.12770.0350.0677unbind0.0830.16060.0400.0774HICbind0.0600.11610.0340.0658unbind0[5]

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| 리포트 | 21페이지 | 1,000원 | 등록일 2003.09.01

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[기기분석] 역상크로마토그래피 (RP-HPLC)

Reversed Phase Chromatography최종훈Introduction 역상크로마토그래피 (Reverse phase chromatography) 1. 비극성의 고정상과 극성의 이동상을 사용하는 HPLC 모드의 총칭 2. 소수성이 높은 컬럼충진제 사용 3. 극성 유기용매로 용질을 용출 4. 비극성 내지는 약한 극성의 화합물분리에 적합 5. 생화학, 의화학 분야에서 널리 응용 6. 단백질이 변성되는 경우가 많음 장점 : 사용하기 쉽고 효율적임 컬럼의 안전성 높고 정확도와 정밀도, 분리의 재현성 높음Theory of reverse phase chromatography 1. 분리기작은 이동상에 용해된 용질과 고정상의 소수성 ligand 의 소수성 결합의 상호작용 2. 이동상의 극성이 첨가된 acetonitrile, Ion pairing agents(TFA) 에 의해 조절된다. 3. sample은 이동상에 용해되어야 한다.(이상적 조건)The matrix (충진제) 화학적, 기계적으로 안정해야 한다. 일반적으로 실리카나 합성고분자계충진제 사용 Silica : 시료분리에 영향을 미치는 것은 리간드의 종류, 탄소함유율, 잔존실라놀기 세공이 큰 실리카겔은 입체장해가 적으며, 고분자 단백질의 분리에 적합 사용 pH가 한정되어 있음. (pH2~8)The matrix (충진제) 합성고분자계 충진제 다리형성도를 높여 그물눈을 키우고 입자 크기를 낮춘것 기계적 강도 높고 팽윤, 수축율이 적음 유기용매에서도 겔 사이즈가 변하지 않음. 친수성이 높음 저분자량 비극성 물질의 분리에 사용됨. (단백질과 펩타이드 분리에도 사용) 실리카겔보다 내압성은 떨어짐The Ligands (결합체) Linear hydrocarbon chain (n-alkyl group)이 ligand로 가장 많이 사용 단백질에 특이적으로 결합하는 저분자물질, 기질 , 조효소 조절인자 C18이 C8 보다 결합력이 높아 많이 사용Resolution in reverse phase chromatography Resol = ¼(-1/)(N) (k′/1+k) : 분리계수 N : 이론단수 K′ : capacity factor분리도에 따른 분리결과의 차이Resolution(분리도)Resolution in reverse phase chromatographyCapacity factor : k′ 시료가 컬럼의 고정상에 충분히 머무르게 하는 효과 k′= moles of solution in stationary phase / moles of solute in mobile phase K′의 변화는 시료의 분리에 큰 영향을 미친다.Resolution in reverse phase chromatographyEfficiency (N) : 이론단수 컬럼의 효율표시, 일반적으로 최소한의 N값이 3000이상 입자크기, 컬럼길이, 유속에 따라 틀려진다. N= 5.54( V1 / W 1/2 ) V1 : Retention volume W ½ : peak height 중간의 weightResolution in reverse phase chromatographyEfficiency (N) : 이론단수 이론단수가 증가하면 분리능도 증가한다.Resolution in reverse phase chromatography해당높이 (H) =L/N (L= 컬럼길이)Selectivity() : 선택성 컬럼에서 용출되는 각 성분의 분리의 차이 용매의 종류와 컬럼의 종류에 따라 결정된다. = k′2 / k′1=V2-V0 / V1-V0= V2 / V1 =0일때 두 시료는 전혀 분리 안됨 1일때 분리가 가능하며 값이 클수록 분리가 좋아짐Resolution in reverse phase chromatographyBinding capacity 단백질의 분리에는 세공이 큰것이 좋음. 충전제의 입경이 작을수록 분리력은 증대. 리간드의 탄소수가 많을수록 흡착력은 강함..Resolution in reverse phase chromatographyCritical parameters in reverse phase chromatog용출법에서 농도기울기를 추적하여 가장 적합하도록 정함 단백질의 분자량이 클수록 컬럼의 최적길이는 작아도 됨 농도기울기가 작을 수록 컬럼길이는 길어지고 분리력은 증가Critical parameters in reverse phase chromatography Flow rate 고분자물질 보다 저분자 물질에 영향이 크다. 유속 늦추면 분리력 증가 온도 컬럼온도가 증가하면 solvent 점도가 감소되 시료가 용출되기 쉬움 50oC 이하에서 분리Mobile phase (이동상) 역상HPLC에서 가장 중요한 인자 이동상이 화합물의 체류시간에 영향을 주므로 적절한 선택이 필요 이동상은 시료를 칼럼 속으로 통과하게 해준다. (HPLC용은 순도가 높아야 함) 가격, 비점, 점도 등을 고려 일반적으로 CH3CN, MeOH, Water가 사용됨.Critical parameters in reverse phase chromatographyIon pairing agent (용리계) 실리카겔 충전제에서 실라놀기를 완전히 없애는 것은 불가능 보통 산성pH(2~4)에서 사용 산성pH를 갖는 시약은 과염소산, 인산, 아세트산, 트리플르오르아세트산(TFA)등. 이들을 기본으로 극성 유기용매의 농도를 올리면서 단백질 용출 유기용매는 산과 혼합하여 방치하면 열화되기 때문에 사용직전에 조제함.Critical parameters in reverse phase chromatographyGradient elution 용매의 농도를 달리하여 원하는 물질을 분리 High resolution separation 유속과 컬럼의 길이와 같은 인자들의 용출의 최대화에 관여Critical parameters in reverse phase chromatographyStage in a purification scheme Capture : 신속한 분리, 농축, 안정화를 위하여 source material 로부터 목표물질을 선택 Intermediate purification : 정제와 농축을 위하여 불순물 제거 Polishl parameters in reverse phase chromatographyMethod시료의 전처리Moblie phase (이동상)Column시료의 전처리목적 시료용액 속에서 시료성분이 검출되기 적당한 농도로 존재하도록 하기 위함. 가능한 간단하게 (정확도, 신뢰도, 재현성, 안전성 향상) 고려할 점 분석하고자 하는 시료성분의 종류 및 포함된 시료의 양을 안다 성분이 포함되어있는 Matrix를 안다 시료전처리과정을 되도록 단순화 시킨다. 모든 시료는 여과하여 입자가 제거된 상태로 주입한다. 방법 centrifuge, filteration, solvent extraction, distillation, solid phase extraction(Sep-Pak)Moblie phase (이동상)주로 발생하는 문제 이동상의 오염과 기포 이로 인한 현상 : baseline의 불안정, 압력의 변화, 머무름 시간의 재현성 상실 이동상의 선택 HPLC용 용매이어야 한다. (순수도) 물을 사용하는 경우 비저항 값이 18MΩ 이상 되는 초순수의 물 이어야 한다 점도가 낮아야 한다두 용매를 혼합해서 사용하고자 할 때에는 반드시 섞임성이 좋아야 하며 Miscibility Number의 차이가 15 이상 나지 않도록 한다. 이동상은 고정상을 녹여선 안된다. 분리하고자 하는 시료는 반드시 이동상에 녹아야 한다. UV cutoff 및 Refractive Index가 낮은 용매를 선택한다. 이동상 제조시 주의사항 : v / v으로 용매계량 반드시 탈기(degassing)하여 사용 용기는 차광 밀폐용기가 좋으며, 이동상이 buffer인 경우 플라스틱 용기가 좋다. 이동상을 담는 용기는 잘 세척하여 사용Moblie phase (이동상)이동상의 선택Column보통 Octadecyl 관능기가 부착된 실리카 고정상이 채워져 있으며분리 용도에 따라 다양한 길이와 직경을 갖는다. 보통 길이가10~30cm, 직경이 5mm 정도임. 고압에서 사용하도록 스텐레스 재질임. 보통 물과 유기용매를 혼합한 용액에olumn길이 : 길이가 길수록 N 값이 높아진다. 충진물의 평균 충진 크기 : 입자 크기가 작을수록 N 값이 높아진다. 충진물 크기의 분포 : 될수록 크기가 비슷한 입자의 분포 (입자가 고른분포) 가 N 값을 높인다. Column bead의 형태 충진물의 다공성 : 충진물의 다공 크기가 클수록 정량분석보다는 분취에 가 까운 실험에 유리하다. Injection volume : Column의 dead volume(빈공간)의 1/100이상 되는 volu me을 주입시 peak가 broad 하게 되고 퍼진다.Column효과적인 Column 선택Injection sample의 무게 : 너무 많은 농도를 가진 sample 주입 시 분리가되지 않고 overap된다. 용매의 점도 : 점도가 높을수록 N 값이 낮아지다. 온도에 따라 점도는 영향을 받는다. 온도에 따라 물질이동이 영향을 받는다. Column내경 : 내경이 작을수록 sample의 확산이 적어서 N 값이 높아진다. Packing shape : 충진 입자 모양이 구형일수록 더 치밀하게 충 진되고 N 값이 높아진다.ColumnColumn효과적인 Column 선택N 값은 K′과 반비례한다. Extra Column Effect : Guard Column을 사용하지 않아야 되는 실 험에 장착하면 dead volume이 커져서 N 값 이 낮아진다. 혼합효과 : 이온화, 중복화, 흡착화Column의 평형안정한 baseline을 나타낼 때 까지 게속해서 이동상을 흘려줌. (유속을 변화시키면서)Backpressure영향을 미치는 요소 : Column길이, 유속, 이동상의 점도, 온도, 충진물 입자크기 (물/메탄올 gradient 분석 시 발견)ColumnColumn cleaning극성 – 비극성 – 극성용매의 순으로 세척 Ex) H2O – MeOH – Chloroform – MeOH – H2O *사용 pH 범위 준수 (2~8)Column storageSilica-based : MeOH (100%) Polystyrene-based

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| 리포트 | 30페이지 | 2,500원 | 등록일 2004.04.28

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[생화학 실험] 탄수화물의 정량 정성 분석

1. 실험제목 탄수화물의 정성, 정량 분석① 환원당의 정량적 분석 - 네오쿠프로인(neocuproine)② glucose의 정량 분석 - glucose oxidase 방법2. 실험일자 2001년 12월 2일3. 제출자4. 실험목적glucose standard 용액의 흡광도를 측정해서 표준 검량선을 만들어 보고, 그 검량선을 이용하여 미지시료의 흡광도를 가지고 미지시료의 농도를 알아본다.5. 원리5-1. 탄수화물: 탄수화물(炭水貨物/carbohydrate)은 탄소 산소 수소의 세 원소로 이루어진 화합물이다. 대부분이 탄소와 물의 화합물 형태인 일반식C_m (H_2 O)_n을 갖고 있으나 당의 성질을 가진 유기물 또는 당과 구조와 반응 등이 비슷한 유기물을 말한다. 구체적으로는 단당류를 기본으로 하고, 그 유도체인 당알코올 알돈산 우론산 당산 및 간단한 배당체 이노시트 아미노당 및 그 밖의 중합체를 말하기도 한다. 중합도에 따라 크게 단당 올리고당 다당으로 나눈다. 녹색식물에 의해 이산화탄소와 물로부터 합성(광합성)되어서 그 구조체(셀룰로오스 헤미셀룰로오스 등)나 저장영양(녹말 이눌린 등)이 된다. 지구상에 가장 많은 유기물이며, 동물체 내에서는 글리코겐으로 저장된다.5-2. 탄수화물의 정량분석(물질을 구성하는 양적 관계를 명확하게 하는 분석법의 총칭): 탄수화물의 특성에 대해 생화학자가 이용한 방법들은 수년동안 상당히 변해왔다. 탄수화물의 정량에 대해 발달된 방법들을 주로 세 그룹으로 나눌 수 있다.1) 당으로부터 푸르푸랄의 형성과 푸르푸랄의 유도체에 기초한 방법페놀-황산 방법을 이용한 총 탄수화물 내용물의 측정법: 전체 탄수화물의 농도를 정량하는 비색측정 방법은 끓는 강한 무기산(농황산)에서 탄수화물을 분해시켜서 푸르푸랄 또는 푸르푸랄 유도체를 만드는 것에 기초를 두고 있다. 푸르푸랄과 유도체들은 단지 단당류들로부터 생성되기 때문에 다당류들을 포함하고 있는 모든 당 내용물의 측정은 우선 글리코시드결합의 가수분해가 필요하다. 형성 후에 푸르푸랄은 페놀류(예, 페두가 정반응을 하게 된다.당 + Cu^++& ->& 당-산 +Cu^+Cu^+ -네오쿠프로인 &->& 적색 착화합물붉은 빛을 띠는 Cu+-네오쿠프로인 착화합물은 수용성이고 460nm의 빛에서 최대의 흡광도를 나타내며 생성된 색조의 양은 산화된 당의 양과 비례관계를 이루며 분광기로 그 양을 측정할 수 있다. 이 방법의 농도의 범위는 0.02 몰/ml에서 0.2 몰/ml 사이에 있다.3) 특이한 효소 작용글루코오스 산화효소를 이용한 D-글루코오스의 정량: 실험1,2에서 제시한 당의 정량방법은 시료가 글루코오스등과 같이 특정 당으로 판별되지 않은 경우에는 적용할 수 없다. 글루코오스의 확인 및 정량실험은 글루코오스에 강한 특이성을 갖는 효소를 사용함으로써 실시할 수 있다. 이 경우 가장 널리 쓰이는 효소는 글루코오스 산화효소(glucose oxidase)이다. 글루코오스 산화효소는 다음의 반응식에 따라 β-글루코오스를 D-글루콘산(D-gluconolactone)으로 산화시킨다.D-글루코오스 + O_2 &->& D-글루콘산 +H_2 O_2글루코오스 산화효소는 D-글루코오스의 β-아노머에 대하여 큰 특이성을 갖는다. 하지만 글루코오스 산화효소는 D-글루코오스의 정량에 아무런 문제없이 사용할 수 있다. 수용액에서 글루코오스는 변광회전하여 글루코오스의 α-아노머와 β-아노머가 동적 평형을 이룬다.글루코오스의 정량을 위해 글루코오스 산화효소 외에 퍼옥시다아제(PEROXIDASE)를 상요한다. 다음의 반응식에 따라 퍼옥시다아제는 글루코오스 산화효소에 의해 형성된 과산화물을 물과 발색제인 o-디아니시딘으로 환원시킨다.H_2 O +환원 o-디아니시딘 & -> & H_2 O + 산화 o-디아니시딘무색 퍼옥시다아제 유색산화된 발색제의 양은 분광광도측정을 통해서 알 수 있다. 글루코오스 산화효소는 글루코오스의 1번 탄소를 산화시키므로, 글루코오스의 1번 탄소에 다른 작용기가 붙어 있는 경우에는 효소의 반응이 일어나지 않게 된다. 글루코오스 산화효소를 이용해서 글루코오스를 정량하는 실험은 때문에 여러 번 전개시킬 수 있고 표면의 손상 없이 시약을 사용할 수 있다. 간단하고 저렴하게 현미경 슬라이드에 코팅하여 깨끗하게 건조시킨 후 뚜껑이 있는 비커에서 전개시킨다.만일 매우 단순한 당 혼합물 분리를 위한 TLC를 하기 위해서 적당한 용매를 선택하는 것은 쉬운 일이 아니다. 초기 선택은 참조된 용매의 시스템들 사이에서 의거한다. 그러나 만일 이러한 모든 것들이 불충분하다고 판명되면 문헌을 참조하여 적합한 용매계를 선택할 수 있다. 그러나 주목할 것은 1차원적 전개에서는 최적의 조건에서 최고 약 10개의 탄수화물이 분석되지만, 만일 적당한 2차원 시스템이 적용된다면 약 20개까지 증가시킬 수 있다. 만일 차별적 검출 시스템이 사용되지 않는다면 탄수화물의 상대적 Rf값이 약 5% 이내에 분해될 수 없다. 용매는 일반적으로 2차, 3차, 4차 용매이고 항상 부피의 10~20%정도의 수용액을 포함한다. 혼합물의 구성에 있어서 작은 변화도 탄수화물의 상대적 이동과 분리능에 예상치 못한 결과가 초래된다. 예를 들면 전개순이 글루코오스, 만노오스, 갈락토오스의 순서가 변할 수 있다. 그러므로 특히 실험실에서는 Rf 또는 R글루코오스 값이 항상 일정한 변수로 간주되지 않는다. 이러한 Rf 나 R글루코오스 값은 온도, 습도, 코팅방법, 코팅두께, 예비처리법, 크로마토그래피 탱크의 크기 등에 의하여 변화한다. 따라서 문헌의 값들은 단지 참고 목적으로 사용될 수 있자. 일반적으로 만일 탄수화물이 더욱 소수성이거나 분자량이 더 작다면 더 높은 Rf값을 갖는다. 그러나 이런 규칙에 예외적인 것들도 많다.Polysaccharidepurified, homogeneousNativePartial DegradationMild HydrolysisMild MethanolysisMild Reductive CleavageEnzymatic HydrolysisSmith-Degradtionβ-EliminationDeamiinationCompleteDegradationAcid Hydrolysi)분광광도계의 구성① 광원자외부에서는 보통 수소방전관을 사용하였으나 최근에는 약 3배의 강도를 가지는 중수소방전관을 사용하고 있다. 특히 강력한 광원이 요구될 때는 크세논 방전관을 사용하기도 하나 상당히 고가이며 수명이 짧은 단점을 지니고 있다.가시부에서는 텅스텐 필라멘트 램프를 사용하며 필라멘트는 350~2500㎚의 연속적인 방사선을 방출한다.② 단색화 장치광원에서 나오는 넓은 파장범위의 다색이면 연속적인 복사선을 파장폭이 좁은 단색의 복사선으로 바꾸는 장치로서 대개 단색화장치를 사용한다. 단색화장치에서 다색광의 분광장치로는 프리즘 혹은 회절격자를 사용한다. 가시권영역에서는 유리제 프리즘을 사용하며 자외선영역에서는 석영 프리즘을 사용한다.프리즘 단색화장치에 의한 백색광의 분광의 원리는 그림 2-9와 같다. 회절격자는 고도의 반사가 일어나도록 알루미늄으로 표면처리하여 그 표면에 1인치당 1500∼3000개 정도의 간격으로 평행선을 새긴 것이다.③ 검지기단색화장치로부터 나온 빛은 시료를 통하여 검지기에 들어가 광전관에 부딪치게 된다. 최근의 분광광도계는 거의가 단일형 광전관이 아니고 광전면을 관의 측면 또는 머리부에 가지고 있는 광전자 증배관을 사용하고 있다. 관 내부에 입힌 물질은 알칼리금속산화물이며 감도가 매우 좋고 반응시간이 빠르다. 광전과 내에는 염화코발트로 착색한 실리카겔이 건조제로 들어 있고 건조시는 청색을 띠나 흡습하게 되면 분홍색을 띠므로 년 1∼2회 교환하여야 한다.2)분광광도계의 사용법① 용매자외가시분광광도법에서는 시료를 희석하여 몇㎎％이하로 사용할 때가 많으므로 용매를 잘 정제하여야 한다. 표2-2는 자외가시스펙트럼의 측정에 잘 쓰이는 용매와 가시자외광 투과의 최저한계를 나타내고 있다.정제용매최저투과한계정제용매최저투과한계AcetoneBenzene사염화탄소이황화탄소ChloroformDichlorohexaneDichloromethaneDioxane25*************215235225Ethyl ether95% ethanolIsooctaneI띠들로 나타난다. 이러한 이유는 분자의 바닥상태와 들뜬상태의 에너지준위들은 모두 회전 및 진동하는 부준위들로 세분되어지기 때문이다 전자전이는 바닥상태의 한 부준위에서 들뜬상태의 한 부준위로 일어나는데 이들 다양한 전이에너지의 차이는 아주 작기 때문에 흡수 파장 역시 조금밖에 차이가 나지 않아서 폭넓은 흡수띠가 나타나게 되는 것이다어떤 물질은HPLC에서 분석할 때 미리 자외선스펙트럼을 측정하여 흡수극대파장을 알아야만 그에 맞는 칼럼을 선택하여 좋은 결과를 얻을 수가 있다.또한 산화되기 전의 지질과 고온 및 산소에 의해 산패된 지질의 자외선 스펙트럼을 각각 측정하면 양자간에 흡수극대파장의 변화가 일어난 것을 알 수 있다.6. 시약 및 기자재6-1. 환원당의 정량적 분석 - 네오쿠프로인(neocuproine)분광광도계(spectrophotometer), 100℃ 가열을 위한 수조, vortex mixer, 시험관, pipetman, 알칼리 구리 용액(용액 A: Na2CO3(무수물) 40g, glycine 1.6g, CuSO4·5H2O 0.45g in 1L증류수), 네오쿠프로인 (용액 B: 1.2g의 neocuproine in 1L 증류수), 0.2 mM D-glucose 수용액(36mg glucose in 1L 증류수), 미지 농도의 환원당 수용액6-2. glucose의 정량 분석 - glucose oxidase 방법분광광도계(spectrophotometer), 37℃ 물중탕 용기, 소용돌이 혼합기(vortex mixer), pipetman, eppendorf tube, 0.2 mM glucose 표준용액, 미지시료, 4N HCl, glucose oxidase 시약(용액 A: 50mg의 o-dianisidine dihydrochloride in 20ml 증류수, 용액 B: PGO 정제 1개 [500unit의 glucose oxidase + 100 unit peroxidase] in 100ml 증류수, 용 액 A 1.6 ml와 용액 B 100ml을 섞어 4℃에 보관한 방법

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| 리포트 | 11페이지 | 1,000원 | 등록일 2002.03.09

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