세균염색과 형태관찰(Gram staining)

소개

Gram staining의 자세한 설명과
예비리포트와 결과리포트가 다 있습니다.
결과 리포트에는 실제 현미경으로 관찰한 그람 양성 `음성균의 염색 결과 사진도 첨부해
두었답니다 또한 레퍼런스가 매우 자세히 적혀 있습니다
이해하기 쉽도록 정리 되었으니 잘 활용 하세요^^

목차

pre report
1.introduction
2.reference
result report
1.introduction
2.materials
3.methods
4.result
5.discussion
6.reference

본문내용

1. Introduction
그람 염색법은 1884년 Hans Christian Gram에 의해서 처음 개발된 방법으로 각종 검체 및 배양집락의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단 할 수 있게 된다. 그람 염색은 각 세균의 세포벽을 이루고 있는 성분과 구조에 따라 다르게 나타났는데 그람양성세균의 경우 세포벽이 두꺼운 peptidoglycan layer와 풍부한 teicoic acid로 이루어져 있어서 organic decolorizer(탈색제)로 탈색시 쉽게 탈색되지 않으며 따라서 염색액 crystal violet이 계속 세균내에 남아있어 보라색으로 염색된다.
반면 그람음성세균은 peptidoglycan layer가 단일층으로 되어 있으며 세포벽의 지방성분이 풍부한 lipopolysaccharide(LPS)로 이루어져 있어 organic decolorizer(탈색제)에 의해 crystal violet이 쉽게 탈색되며 따라서 대조염색액인 safranine O로 염색되어 붉은색을 나타낸다.
Gram staining의 기본원리는 Gram(+)균과 Gram(-)균의 세포막 구성의 차이를 이용한 것이다. Gram(+)균은 cell wall에서 peptidoglycan layer가 차지하는 비율이 아주 높고 lipid의 비율이 적기 때문에 95% Ethyl alchol에 의해 덜 탈색 된다. 그러나 Gram(+)균은 반대로 cell wall에서 lipid가 차치하는 비율이 아주 높고 peptidoglycan layer의 비율이 적기때문에 95% Ethyl alchol에 의해 탈색이 일어나게 된다 세포벽 차이점은 구별하는 그람 염색법은 감별 염색법으로 가장 널리이용 되는 방법이며 그람염색반응은 계통발생학적으로 서로 연관성이 있는 균종들 사이에 여러가지 형태학적 특성과 서로 긴밀한 관련이 있으므로 세균분류 지표가 된다. 이 염색법은 기술이 미숙하면 그릇되게 판정하기 쉬우므로 숙련될 때 까지 많은 연습이 필요하다.
또 어린 배양균은 염색성이 좋으나 노쇄시 배양균은 염색성이 좋지 않아 그람 양성균이 음성균 같이 보일때가 많으므로 주의 하여야 한다. 그람 양성균은 염색한 세균을 알코올같은 탈색제로 탈색하여도 크리스탈 바이올렛 또는 메틸바이올렛-요오드 복합물이 세포속에 그래도 머물러 있게 된다.
그 반대로 그람 음성균은 염색한후 알코올에 의하여 완전히 탈색된다.
색소-요오드 복합물을 탈색액으로 처리했을때 그대로 균체안에 머물러 있게 하는 것은 세포벽의 역할이라 한다.
두꺼운 세포벽을 가진 세균은 그람 염색시에 사용되는 크리스탈 바이올렛을 흡수하여 보유하는 성질을 가지고 있다 이와같은 세균을 그람 양성이라고 부르며,흔히 다른 색깔로 대비염색(counter stain)을 하게 된다.

참고자료

· 환경 미생물학 신광문화사 2002.7.20 편저 박철희 외1명 33쪽