Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)

소개

알티피씨알에관하여 조사했습니다.
세포생물학실험

목차

1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 실험 재료
4. 실험 방법
5. 예상 결과
6. 참고 문헌

본문내용

2. 실험 원리
○ 예전에는 제한효소를 사용하거나 물리적으로 DNA를 잘라 원하는 DNA 조각을 클로닝 해 왔다. 그러나 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction: PCR)이라는 방법으로 클로 닝을 위한 DNA조각을 만들 수 있고, 이는 cDNA를 클로닝 하는데 매우 유용하다.


<중합효소연쇄반응(PCR)에 의한 DNA의 증폭>

PCR은 Kary Mullis와 그 동료들이 1980년대에 고안했다. 이 방법은 DNA중합효소를 이용 해 DNA의 일부분을 복제하는 방법이다. 만약 X라는 DNA의 일부를 증폭시키고 싶다면 작 은 DNA조각(primer)들을 X의 양쪽에 결합시키고, 이로부터 X쪽으로 DNA가 합성되도록 한 다. 이렇게 형성된 새로 생긴 X의 양 사슬이나 원래의 DNA들을 다음 단계에서 다시 한번 증폭시킨다. 이러한 방법으로 원하는 DNA부분을 각 단계마다 두 배로 늘려서 최대한 원래 DNA보다 백만 배가량 증폭시키면 전기영동으로 분석할 수 있을 정도가 된다. 원래는 DNA중합효소는 각 단계의 복제과정에서 DNA사슬을 분리하기 위해 높은 온도(90℃ 이상)를 가할 때 효소의 기능이 파괴되기 때문에, 각 단계마다 새로운 DNA중합효소를 넣어주어야 했다. 그러나 열에 대한 저항성이 강한 특별한 DNA중합효소가 발견되어 그 문제가 해결되게 되었다. 그 중 하나가 Taq 중합효소로 터무스 아쿠아티구스(Thermus aquaticus)라는 온천에 사는 세균에 존재하며, 열에 대한 저항성이 강한 효소이다. 그러므로 Taq 중합효소와 primer와 주형을 시험관에서 섞어주고 시험관을 닫은 다음 온도 순환계(thermal cycler)에 넣어주면 반응이 진행된다. 이 기계를 세 종류의 다른 온도를 반복하도록 프로그램하면

참고자료

· 분자 생물학 노트 권익태 저 한국 과학 기술연구원 유전공학연구소 1991. 04. 20
· p 135~137
· 분자생물학 박상대 저 라이프사이언스 2003. 12. 18 p 66~71