Proteinanalysis

목차

실험 목적

실험 원리
1)단백질
2)단백질의 구조
3)단백질 정량

실험 방법

참고문헌

본문내용

2.실험 목적
-단백질의 비색정량법으로 가장 많이 사용되고 있는 것이 Lowry법과 Biuret법이며 감도는 각각 1-200ug, 0.25-200mg으로 lowry법이 biuret반응보다 훨씬 좋다. Biuret반응은 biuret이 alkali성 용액중에서 Cu2+ ion 과 반응 하여 보라색으로 되는 것에서 유래한 것이며 peptide결합의 존재에 기인되는 반응이기 때문에 어떠한 종류의 단백질에 대해서도 정색반응을 나타내므로 정량에 응용되고 있다. Lowry등의 고안한 Lowry정량분석법은 용액에 있는 단백질뿐 아니라 건조도나 시료에도 이용될수 있다. 특히 이 정량방법은 5㎍/ml 정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이여서 널리 쓰이고 있다. 이 방법에서 사용하는 Folin-ciocalteau 시약에 의해 발색은 비우렛 실험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응과 포스포몰리브덴산 포스포팅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판 등에 의한 환원반응으로 생긴다. 색의 세기는 이러한 물질들의 조율에 따라 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지도 않다. 그럼에도 불구하고 이 방법은 미량의 단백질을 효과적으로 측정하는 것이 가능하므로 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는 데는 매우 유용한 방법이다. Lowry법에서 생기는 청색은 뷰렛 반응에서와 같이 구리이온이 펩티드 결합과 반응하는데 기인되며, 포스포몰리브덴 산을 함유하는 착화합물 시약을 단백질에 있는 티로신과 트립토판 잔기들이 환원시키는데도 기인된다. 이번 실험에서는 Lowry법의 원리를 이해하고 이 방법을 이용하여 단백질을 정량화한다.

참고자료

· -효소단백질정제법, 안용근, 良書閣, pp64～68
· -실험생화학, 洪錫禹, 探求堂, pp82～84
· -http://www.shingu.ac.kr/~dolchoi/lc_bc/bc3-3.html