[화공생물공학단위조작실험1 A+] Enzyme kinetic assay Horseradish Peroxidase 결과 레포트

소개

"[화공생물공학단위조작실험1 A+] Enzyme kinetic assay Horseradish Peroxidase 결과 레포트"에 대한 내용입니다.

목차

I. 시약 세부

II. 결과

III. 고찰
1. 실험 오차
2. 반응 메커니즘
3. 결과 분석
4. Eadie-Hofstee Plot, Hanes-woolf Plot

본문내용

1. 시약 세부
• ABTS
일반적으로 과산화효소에 대한 기질로 사용되고, 효소를 표식자로 항원항체반응을 이용한 효소면역분석법인 ELISA를 통해 분자 사이 결합을 감지한다. 본 실험에서는 과산화효소인 HRP의 기질로 사용되었다.

• HRP (horseradish peroxidase)
과산화수소가 기질을 탈수소화하는 반응을 촉매하는 산화환원 효소이다. 분자량은 약 44,000이고, 흡수 스펙트럼은 640, 500, 402nm에서 최대로 흡수하는데, 과산화수소를 첨가 하면..

<중 략>

• H2O2
과산화수소는 순수한 상태에서 옅은 푸른색을 띠고 투명한 액체이다. 물보다 점성이 약간 크며, 산화제, 표백제, 소독제 등에 사용된다. 불안정하며 염기나 촉매 하에서 서서히 분해되 어 약산성 용액에 안정제를 첨가하여 보관한다. 과산화수소를 사용하거나 분해하는 효소를 peroxidase로 분류하며, 본 실험에서는 HRP가 과산화수소가 기질을 탈수소화하는 반응을 촉 매한다.

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2. 반응 메커니즘
첫 번째 단계에서 ABTS는 반응을 통해 라디칼이 되는데, 과산화수소의 농도가 충분히 높 으면 두 번째 단계로 넘어가서 2가 ABTS로 바뀌며 과잉 산화물이 생성되는데, 산소 이온이 pH 변화를 일으키고, TMB에서 구조적인 변화가 일어나서 무색에서 푸른색으로 색이 변화 하게 된다. 반면에, 과산화수소의 농도가 낮다면 세 번째 단계로 넘어가는데, 라디칼이 다시 ABTS로 돌아와 반응을 시작한 지 10분 이내에 무색으로 다시 돌아가게 된다. 0.1M pH6 potassium phosphate buffer를 넣는 이유도 이러한 이유와 비슷하고, 반응 정도를 조절하기 위해 수소 이온의 농도를 조절해볼 수 있을 것이다.

참고자료

· 화공생물공학과 교수진, “화공생물공학단위조작실험1”, 동국대학교 화공생물공학과, 2024, pp.46-54
· Paula Yurkanis Bruice, "Organic Chemistry", 6th ed, Pearson, 2011, pp. 537-552.
· Kevin Ahern 외 2명, “Biochemistry free for all”, OSU, 2018, pp.337-362
· Willey 외 2명, “프레스코트 미생물학”, 라이프사이언스, 2021, pp. 135-183