12주차_protein expression

목차

I. Purpose

II. Theory
1. Expression vector (pET vector)
2. Operon (lac operon)
3. Inducer (IPTG)
4. Optical density (OD600)
5. Bacterial growth curve
6. Green Fluorescent Protein (GFP)

III. Apparatus/reagent

IV. Procedure
1. Pre-culture (실험수업 전날)
2. Culture
3. Pellet 만들기

V. Data&Results

VI. Discussion

본문내용

Purpose: pET 발현 시스템을 이해하고, 이를 이용하여 형광단백질을 발현해 본다.

Theory
1. Expression vector (pET vector)
pET vector는 E. coli에서 recombinant protein을 발현하기 위해서 사용되는 expression vector이 다. expression vector는 molecular cloning 과정을 통해서 얻은 recombinant DNA를 competent cell과 같은 다른 세포로 운반할 때 사용된다. pET의 경우 plasmid에 해당하지만, 이외에도 viral vector, artificial chromosome 등이 존재한다. vector로 사용되기 위해서는 세포 내에서 자 가 복제가 가능해야 한다. 그리고, cloning 시 restriction enzyme에 의한 digestion 과정을 거 치므로 restriction enzyme에 의해 인식될 수 있는 sequence가 존재해야 한다. 마지막으로, selective marker가 존재할 때 cell-selection이 용이하므로 selective marker로 사용될 수 있는 성질이 있는 것이 좋다. expression vector는 새로 도입된 cell이 갖는 gene expression system 에서도 작동할 수 있도록 promoter, multi cloning site; MCS, 전사 종결부위 등이 개조되어 있 다. 또한 효율적이고 정확한 발현이 가능하도록 적절한 promoter가 존재해야 한다. promoter 에 따라서 전사가 조절될 수 있으며, 실험에서 사용하는 pET-16b vector에는 T7 promoter가 존재해서 T7 RNA polymerase에 의해 selective하게 발현된다.

2. Operon (lac operon)
Operon은 protein의 구조에 대한 정보를 가진..

<중 략>

참고자료

· Jeremy M.Berg, Biochemistry, 8th, W. H. Freeman, 2015, pp1230~1246