생화학실험 예비보고서 단백질 정량(Bradford Assay)

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 시약 및 기구
4. 실험방법

본문내용

실험목적
- 단백질 정량 방법 중 Bradford Assay의 원리를 이해하고 이것을 이용해 미지 시료에 있는 단백질을 정량한다
- UV/Vis-Spectrophotometer의 기본원리 및 사용법을 익힌다.

실험원리
1. 단백질 정량
: 가지고 있는 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정
여러 가지 단백질 정량법이 있는데, 감도․간편함․단백질의 종류에 의한 감도의 차이․방해물질의 종류와 허용 농도 및 반응 액의 pH 등의 차이에 따라 선택한다.

1) 비색정량적 방법(Colorimetric)
: 미지 시료용액 및 기지 표준용액에 적당한 시약을 가하는 등으로 착색시켜 양자의 색깔의 농도와 색조를 투과광이나 반사광으로 비교하여 정성 또는 정량하는 방법

(1) Bradford Assay (이번 실험)
: Marion Mckinley Bradford에 의해 발견된 것으로, UV-Vis Spectrophotometer를 이용해 흡광도를 측정하여 BSA (Bovine Serum Albumin)를 기준으로 미지 시료에 단백질이 얼마나 들어있는지 측정하는 방법.

<그림 중략>

Bradford assay의 원리
: 미지시료 속 단백질과 단백질을 염색시켜주는 Coomassie brilliant blue dye가 반응에 참여한다.
산성용액에서 Coomassie dye는 먼저 자신의 자유 전자를 단백질의 ionizable group(amino acid)에게 주고 단백질을 변형 → 변형된 단백질은 소수성 부분을 노출시키고, 반데르발스힘을 통해 dye의 non-polar한 부분과 결합, 양전하를 띠는 아민기는 dye의 음전하와 가까워 짐 → Protein-Dye complex를 형성하여 붉은색에서 푸른색으로 변화하고 동시에 안정화 녹아있는 complex의 양은 단백질 농도 측정의 수단이며, 분광기를 이용해 측정

흡광도 측정
: 산성용액에서 Coomassie brilliant blue는 단백질과 결합하여 최대 흡광도()는 465nm에서 595nm로 이동 하므로 595nm에서 흡광도를 측정

참고자료

· 없음