알파-lactalbumin의 분리 및 동정(Result and Discussion)

소개

우유단백질인 알파 lactalbumin을 겔 크로마토그래피와 친화 크로마토그래피로 분리하고
흡광도 측정을 하여 농도를 알아내며,
브래드포드 시약을 이용하여 standard curve를 작성하고 이를 토대로 알파 lactalbumin 용액의
농도를 알아냅니다.
생화학 실험 레포트로 에이뿔 받은 과제입니다.

목차

없음

본문내용

단백질의 농도(mg/ml)는 흡광도 측정을 통하여, ①의 식으로 구하거나 ②Beer-Lambert 식을 이용하여 구할 수 있다. 단백질이 포함되어있는 용액의 총 부피를 알면, 농도와 부피의 곱을 이용하여 용액 내 포함된 단백질의 질량을 알 수 있으며, 앞서 측정한 흡광도를 이용하여 순도(/)를 알 수 있다. ① 및 ②에 의한 농도 값이 거의 절반정도 차이가 나는데, 흡광도가 잘못 측정되었기 때문으로 생각된다. 단백질이 포함된 샘플의 흡광도를 측정할 때, 혹은 값이 1.5 이상일 경우, 희석하여 측정하여야 하나, whey 그대로의 용액을 측정하였기 때문에 신뢰할 수 없는 데이터를 얻었다.
Gel filtration chromatography는 단백질의 크기(무게)에 따라 분리하는 chromatography 기법으로써 중력에 의해, 무거운 단백질은 빠르게 용출되고 비교적 가벼운 단백질은 느리게 용출되는 원리를 이용하는 것이다. Whey에는 주로 -lactalbumin과 -lactalbumin이 포함되어있는데, -lactalbumin은 18400Da이고 -lactalbumin은 14178Da으로 비교적 -lactalbumin은 whey내의 단백질 중 가벼운 것에 속한다. 이 때문에 용출시, -lactalbumin이 가장 나중에 용출될 것으로 예상할 수 있다. Figure.을 보면, -lactalbumin의 용출 범위는 후반부에 보이는 그래프로 간주할 수 있다. 최대 순도가 0.917이므로 순도 0.85이하의 데이터를 제외한 흡광도 값을 고려할 때, -lactalbumin의 용출 부피는 대략 4ml이다.

참고자료

· 없음