OVCAR-3와 SKOV-3 난소암 세포주에서 Flow Cytometry를이용한 Apoptosis와 p53 단백의 측정

서지정보

· 발행기관 : 대한산부인과학회
· 수록지 정보 : Obstetrics & Gynecology Science / 46권 / 7호 / 2 ~ 2페이지
· 저자명 : 윤주희, 최운민, 조윤성, 나종구, 한구택

초록

OVCAR-3와 SKOV-3 난소암 세포주에서 taxol 투여에 의해 유발된 고사 (apoptosis)의 연구를 통하여 두 가지 세포주들 사이의 p53의 발현과 세포사의 생물학적 기전을 알아보고자 본 연구를 수행하였다.RPMI 1640 배양액으로 배양한 OVCAR-3와 SKOV-3 난소암 세포주를 taxol (paclitaxel)을 투여하지 않은 대조군과 taxol을 24시간 및 48시간 동안 투여한 투여군으로 나누어 실험을 진행하였다. 수확한 세포들을 먼저 annexin V-FITC (fluorescein isothiocyanate)와 anti-cytokeratin 항체인 clone CAM5.2와 clone MNF116과 반응시킨 다음 세포들을 세척하고 p53 항체를 가하여 반응시켰다. 세포들을 세척한 후 FITC와 공유 결합된 goat anti- mouse (GAM) immunoglobulin G (IgG)-FITC (이하 GAM IgG-FITC) 및 GAM IgG-phycoerythrin (PE) 이차 항체와 반응시켜 염색하였으며, 이어서 propidium iodide (이하 PI)를 이용하여 DNA를 염색하였다. 세포들의 분석에는 488 nm의 레이저가 장착된 표준 FACScan flow cytometer로 측정하였다.Taxol을 투여한 후 SKOV-3와 OVCAR-3 세포주 모두에서 G2M에 세포들이 정지된 것으로 보아 정지된 세포들이 궁극적으로는 세포사 과정으로 진입할 것으로 생각되었다. Cytokeratin과 annexin V 및 G0G1 전분기 분획으로 표현된 고사 분획의 출현이 OVCAR-3 세포주에 비해 SKOV-3 세포주에서 낮은 것은 SKOV-3 세포주의 taxol에 대한 낮은 감수성을 나타내는 결과로 생각되었다. SKOV-3 세포주에서 p53 발현은 관찰되지 않았고, G0G1 전분기 분획의 미미한 증가 및 cytokeratin과 annexin V으로 측정된 고사 분획의 변화가 관찰되지 않았다. OVCAR-3 세포주에서 p53이 taxol의 투여 여부와 관계없이 발현되었지만 투여 시간에 따른 증가는 관찰되지 않았던 점과 G0G1 전분기 분획과 cytokeratin과 annexin V으로 측정된 고사 분획의 완만한 증가로 미루어 볼 때 p53의 발현이 세포주기 변화와 G2M 분기의 정지와 무관하였으나 고사의 출현과 관련되어 있을 것으로 생각되었다.이러한 관찰은 향후 종양으로부터 채취한 종양 세포 부유액에 항암 화학요법제를 투여한 후 유발되는 고사의 정도를 신속하고 정확한 flow cytometry로 측정함으로써 항암 화학요법제의 투여 전 감수성을 알아보는 검사법의 개발 가능성을 암시하는 것으로 생각되었다.

참고자료

· 없음