실시간 중합효소연쇄반응을 이용한 유전자 정량분석법의 시험방법 유효화 (Internal Validation of Real Time Quantitative PCR System both with Manual and Automated protocol for Use in Forensic Casework)

서지정보

· 발행기관 : 한국과학수사학회
· 수록지 정보 : 과학수사학회지 / 5권 / 4호 / 336 ~ 343페이지
· 저자명 : 박정현, 김지영, 홍승범, 정요셉, 한시내, 전충현, 안희중

초록

법과학 실험실에서는 감정에 적용한 시험방법의 신뢰성을 입증하기 위해서 새로운 시험방법을 도입하고자 하는 경우 반드시 시험방법의 신뢰성을 검증하기 위한 시험방법 유효화가 선행되어야 한다. 본 연구에서는 미세한 인체시료가 묻은 흔적 증거물이나 오래된 유해 시료와 같은 소량의 DNA가 존재하는 시료를 위한 정확한 유전자 정량분석법을 도입하기 위하여 Applied Biosystems 사의 Quantifiler DUO DNA Quantification kit을 이용하여 실시간 중합효소연쇄반응 기반의 정량분석법에 대한 시험방법 유효화 연구를 진행하였다. Manual protocol과 자동화 장비(Tecan HID EVOlution qPCR/STR setup)를 이용한 automated protocol에 대하여 시험방법 유효화 지침에 따라 시험을 진행하였다. 정밀성, 정확성 및 민감성시험결과 Quantifiler DUO DNA Quantification kit은 안정적인 CT 값과 매우 작은 표준편차를 보여 주었다. 이러한 유효화 시험의 결과는 Quantifiler DUO DNA Quantification kit을 이용한 정량방법이 높은 민감도를 가진 정확하고 재현성 있는 시험방법임을 증명하는 것이다.

영어초록

In the forensic DNA testing laboratories, prior to introducing an existing DNA analysis procedure, reliability of the procedure has to be demonstrated by carrying out internal validation. In order to introduce a sensitive and accurate DNA quantification method for low copy number DNA samples such as trace evidences and old skeletal remains, a validation study of the real time PCR system using the Quantifiler DUO DNA Quantification Kit (Applied Biosystemes) was performed. We have validated protocols for manual and automated Quantifiler DUO setup using the Tecan HID EVOlution qPCR/STR setup. The protocols were validated for Quantifiler DUO DNA quantification according to validation guidelines. Quantifiler DUO DNA Quantification kit showed stable CT values and significantly small standard deviations for precision, accuracy and sensitivity study. The internal validation study has demonstrated that Quantifiler DUO assay is a reliable system with high sensitivity, which gives accurate and reproducible results.

참고자료

· 없음