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[생명공학 레포트] gDNA isolation 및 T7E1 assay를 통한 genome editing 확인2025.05.031. gDNA isolation gDNA는 plasmids와 같은 extra-chromosomal DNAs와는 다르게 chromosomal DNA를 의미한다. gDNA를 분리하는 단계에서는 cell과 CLS(Cell Lysis Solution), proteinase K를 섞어 DNA 추출을 위해 cell을 파괴하는 역할을 한다. CLS에는 SDS, Tris-HCl, EDTA 등이 들어가 있으며, SDS는 cell membrane의 lipid를 제거하고, Tris-HCl은 pH 변화를 방지하며, EDTA는 세포 내의 DNases의 역...2025.05.03
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방사선 조사 및 자외선이 DNA에 미치는 영향2025.11.131. 자외선(UV Radiation)과 Thymine Dimer 메커니즘 자외선은 200-280nm의 파장을 가진 강한 에너지의 전자기파로, 미생물 살균에 사용된다. UV-A, UV-B, UV-C, 진공자외선 등 4가지 종류가 있으며, 특히 UV-C(200-280nm)의 253.7nm 파장이 살균 전용 파장이다. 자외선이 DNA에 조사되면 인접한 두 개의 Pyrimidine 염기(thymine, cytosine) 사이에 공유결합이 형성되어 thymine dimer가 생긴다. 이는 DNA의 RNA 주형가닥 역할을 방해하고 복제 시 오...2025.11.13
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DNA 구조의 이해 & DNA 추출2025.05.111. DNA 구조 DNA는 디옥시리보뉴클레오티드로 이루어진 고분자 중합체로, 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재할 수 있다. 세포를 가진 생물의 DNA는 모두 이중가닥 형태를 가진다. DNA 염기의 구조와 왓슨-클릭 염기쌍의 수소결합 패턴을 이해할 수 있다. 2. 플라스미드 플라스미드는 원핵생물의 염색체 DNA 이외의 자가복제능력을 가지는 DNA환상 분자로, 숙주인 세균에 유전적 다양성을 증가시킬 수 있다. R인자라 불리는 플라스미드는 숙주세포가 항생물질과 독성물질에 저항성을 갖도록 한다. 3. 콜리신 많은 세균균주는 플라스미드에 ...2025.05.11
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현대생물학실험2: 형질전환, PCR, 전기영동2025.11.171. 형질전환(Transformation)과 Competent Cell 형질전환은 외부 DNA가 세포 내부로 들어와 세포의 형질이 바뀌는 현상이다. Competent cell은 외부 DNA를 받아들일 수 있는 상태의 박테리아 세포로, CaCl2 처리와 열충격을 통해 인위적으로 제조된다. DH5α 대장균을 사용하여 log phase(OD600=0.4~0.6)에서 CaCl2와 glycerol로 처리하면 형질전환 효율이 10^9 CFU/μg에 도달한다. 형질전환 효율은 (CFU on plate/pg DNA) × 10^6 × (total ...2025.11.17
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[A]서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. TA Cloning TA Cloning은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 cloning을 진행하는 기법이다. Lac Z selection을 통해 blue colony와 white colony를 확인하여 insert DNA가 정상적으로 삽입되었는지 확인할 수 있다. Self-ligation을 줄이기 위해 alkaline phosphatase 처리나 T-overhang cloning protocol 수정 등의 방법을 사용할 수 있다....2025.01.18
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