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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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마우스 꼬리로부터 게놈 DNA 추출 및 분석2025.01.041. 게놈 DNA 추출 실험을 통해 마우스 꼬리에서 게놈 DNA를 추출하는 과정을 이해하였습니다. 세포 용해, DNA 정제, 농도 측정 등의 단계를 거쳐 순도 높은 게놈 DNA를 얻을 수 있었습니다. 이 과정에서 주의해야 할 점들, 예를 들어 과도한 tapping이나 오염물질 혼입 등을 확인하였습니다. 2. DNA 전기영동 추출한 게놈 DNA를 아가로스 겔 전기영동을 통해 분석하였습니다. 10,000 bp 이상의 큰 DNA 단편이 가장 뚜렷하게 관찰되었지만 번진 모습(smear)을 보였고, 그 외에도 1,000-2,000 bp 및 ...2025.01.04
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PCR 결과레포트: DNA 증폭 및 전기영동 실험2025.11.171. PCR (중합효소연쇄반응) PCR은 특정 DNA 영역을 선택적으로 증폭하는 분자생물학 기법입니다. 본 실험에서는 YiaT, HiA, tres, Ompc 네 가지 target DNA를 증폭시키기 위해 각각의 forward/reverse primer를 사용하여 PCR mixture를 제작했습니다. 95℃에서 변성, 54℃에서 프라이머 결합, 72℃에서 DNA 합성을 30 사이클 반복하는 온도 조건을 적용했으며, lid 온도를 105℃로 유지하여 튜브 내 온도 균일성을 확보하고 증발로 인한 반응 손실을 방지했습니다. 2. 전기영동 ...2025.11.17
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PCR 산물 정제 실험 예비 레포트2025.11.151. PCR 산물 정제 원리 작은 DNA 조각을 정제하는 원리를 이해하고 정제 방법을 숙지하는 것을 목적으로 한다. Column을 이용한 DNA 정제 방법을 사용하여 PCR product를 정제한다. 이 과정에서 Gel & PCR purification system kit을 활용하며, 제조사의 protocol을 따른다. 정제된 DNA는 Agarose Gel 전기영동으로 농도를 확인하고 4℃에서 보관한다. 2. Column을 이용한 DNA 정제 방법 Spin column을 이용한 DNA 정제 과정은 다음과 같다. 정제할 DNA를 포함...2025.11.15
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대장균 배양과 형질전환, 플라스미드 DNA 분리 및 전기영동2025.11.171. 대장균 배양 및 형질전환 대장균(Escherichia coli)은 유전공학 연구에 가장 널리 사용되는 박테리아로, 약 2μm 길이에 0.8μm 폭의 크기를 가지며 약 460만 개의 염기쌍으로 이루어져 있다. 형질전환은 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어 새로운 유전형질을 얻게 하는 과정이다. 본 실험에서는 Competent cell에 플라스미드 DNA를 도입하기 위해 열 충격 방법을 사용했으며, 45℃에서 1분간 열충격을 주어 세포막을 불안정하게 해 플라스미드가 세포 내로 들어갈 수 있도록 했다. 형질전환된 세포는 항생제 저항성...2025.11.17
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제한효소를 이용한 DNA 절단 및 전기영동 분석2025.11.171. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 주로 세균이 보유한 DNA 절단 효소로, 외부 바이러스의 DNA를 절단하여 자기 보호 기능을 한다. 종류에 따라 4개 또는 6개의 염기서열을 인식하여 비점착성 또는 점착성 말단을 생성한다. 같은 효소로 절단된 부위는 동일한 끝을 가지므로, 표적DNA와 플라스미드를 같은 제한효소로 자르고 ligase로 결합시켜 재조합 DNA를 만들 수 있다. DNA 클로닝 등 분자생물학 연구에 광범위하게 사용된다. 2. 전기영동(Electrophoresis) 전기장의 영향으로 전하를 띤 물...2025.11.17
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전기 영동 실험보고서 및 심화탐구활동2025.01.201. 전기영동 실험 전기영동 실험을 통해 이온 샘플 3종이 이동하는 것을 관찰하였다. 크기가 작은 이온일수록 겔을 통과하는 속도가 빠른데, 이는 분자의 크기, 전하, 용액의 점성도 등과 관련이 있다. 전기영동은 DNA, RNA, 단백질 등의 생체 고분자를 분리, 분석하는 데 중요한 방법이다. 2. 전기영동 이론 전기영동에서 분자의 이동속도 v는 전기 장력과 전체전하에 비례하지만, 분자의 크기와 용액의 점성도에는 반비례한다. 이를 수식으로 표현하면 v=Eq/d6πrη 이다. 이 실험을 통해 전기영동의 기본 원리와 이론을 이해할 수 있...2025.01.20
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A+ 생화학실험 <14주차. 단백질 분석 (SDS-PAGE)> 레포트2025.01.201. SDS-PAGE SDS-PAGE는 Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)를 이용해 단백질에 음전하를 부여함으로써 Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE)를 수행하여 단백질을 크기에 따라 분리하는 전기영동 방법입니다. SDS-PAGE는 일반적으로 5~250 kDa 범위의 단백질을 분리하는 데 사용되며, 이 방법을 통해 단백질의 구조와 전하가 이동 속도에 미치는 영향을 제거할 수 있습니다. SDS에 의해 음전하를 띤 선형화 된 단백질은 전기장을 가했을 때 양극(+)을 향해 이동하며, ...2025.01.20
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제한효소 절단 및 아가로스 젤 전기영동 실험2025.11.181. 제한효소(Restriction Enzyme) 제한효소는 박테리아와 고세균에서 발견되는 효소로, 외부 DNA를 인식하고 분해하는 보호 메커니즘이다. 각 제한효소는 4~6개의 염기쌍으로 이루어진 특정 서열만 인식하여 절단한다. 예를 들어 EcoR I은 특정 서열에서만 DNA를 절단한다. 제한효소 반응은 적절한 반응조건(염 농도, pH, 온도 등)에서 DNA와 효소를 배양하여 수행되며, 1 Unit는 지정된 완충액과 온도에서 1시간 동안 λ DNA 1㎍을 완전히 분해하는 양을 의미한다. 2. 아가로스 젤 전기영동(Agarose Ge...2025.11.18
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micro capillary electrophoresis 결과레포트2025.05.161. 전기영동 전기영동이란 걸어준 전기장 내에서 서로 다른 이온, 유전자, 단백질, 세포 등과 같은 다양한 시료성분이 이동하는 현상을 정의하는 것이다. 수용액 상에서 많은 분자들이 양전하나 음전하를 띠고 있는데 이때 전기를 흐르게 하면 음전하를 띠고 있는 것은 – 전극 쪽으로 음전하를 띠고 있는 것들은 + 전극 쪽으로 이동하게 되는데 예를 들자면 DNA는 P을 가지고 있어 음전하를 띠고 있어 전기를 주게 되면 + 전극 쪽으로 이동하게 된다. 이것을 통해 DNA의 크기나 길이 등을 추측할 수 있다. 2. 모세관 전기영동 모세관 전기영...2025.05.16
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