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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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양이온 교환 크로마토그래피 (결과+ 예비)레포트2025.01.031. 양이온 교환 크로마토그래피 양이온 교환 크로마토그래피는 음이온이 달려있는 고정상과 양이온화된 시료 간의 정전기적 인력을 이용하여 양이온화된 시료를 분리해내는 방법입니다. 시료의 pH가 등전점보다 낮은 경우 양의 알짜전하가 강해 양이온 교환 크로마토그래피로 분리하기에 유리합니다. 양이온화가 덜 된 시료일수록 빨리 빠져나오고, 양이온화가 많이 될수록 늦게 빠져나옵니다. 양이온 교환 크로마토그래피는 암 치료, 단백질 정제, 도핑 테스트, 섬유 및 제약 산업 등 다양한 분야에서 활용되고 있습니다. 2. 이온 교환 크로마토그래피 이온 ...2025.01.03
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아스피린의 합성2025.01.231. 아스피린 합성 반응 아스피린 합성 반응은 에스테르화 반응으로, 살리실산의 알코올기 R-OH와 아세트산 무수물이 반응하여 에스터 R-COO-R을 생성한다. 산 촉매 하에서 아세트산 무수물이 수소 이온을 제공받아 카복시기 R-COOH가 형성되고, 이 카복시기와 살리실산의 알코올기가 반응하여 에스터 결합을 형성한다. 이 과정에서 아세트산 무수물의 C-O-C 결합이 깨지면서 아세트산이 생성된다. 2. 재결정을 통한 정제 재결정 과정에서는 용해도 차이를 이용한다. 1차 재결정에서는 반응하지 않고 남은 아세트산 무수물과 아세트산을 제거하...2025.01.23
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식품생화학 RNA 및 단백질의 합성2025.05.071. RNA 합성 RNA 합성은 DNA에 저장된 유전정보를 이용하여 이루어지며, RNA 중합효소, DNA 주형, 전구체(NTP), 금속이온 보조인자가 필요합니다. RNA에는 리보솜 RNA(rRNA), 전령 RNA(mRNA), 전달 RNA(tRNA)가 있으며, RNA 합성은 개시, 연장, 종결의 과정을 거칩니다. 2. 전사의 조절 원핵생물의 유전자 발현은 오페론이라는 유전자 집단으로 조절되며, lac 오페론은 락토스 대사와 관련된 유전자들로 구성되어 있습니다. 락토스 유무에 따라 lac 오페론의 활성이 조절됩니다. 3. 진핵생물의 유...2025.05.07
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단백질의 변성과 응집2025.04.281. 단백질의 구조 단백질은 탄소, 수소, 질소로 이루어진 중요한 유기물이며, 1차, 2차, 3차, 4차 구조로 분류할 수 있다. 1차 구조는 아미노산이 펩티드 결합으로 연결된 선형 구조이며, 2차 구조는 알파 나선 및 베타 병풍 구조, 3차 구조는 2차 구조가 모여 입체 구조를 형성하고, 4차 구조는 3차 구조가 모여 복합체를 이루는 것이다. 2. 단백질 변성 단백질 변성은 단백질의 2차, 3차 또는 4차 구조가 열, 산, 염기, 유기 용매 등의 요인에 의해 변화하는 현상을 말한다. 변성된 단백질은 용해도가 감소하고 생물학적 활성...2025.04.28
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단백질의 다양한 종류와 기능2025.01.181. 단백질의 다양한 종류와 기능 이번 활동을 통해 단백질의 다양한 종류와 기능, 1~4차 단백질 구조에 대한 기본적인 내용을 알게 되었습니다. 또한 전하를 띤 물질을 분리하는 전기영동 실험 방법과 원리를 배웠습니다. 실험을 직접 수행하면서 간과 근육 시료의 단백질 분리 결과를 관찰하고, 기관별 세포 유전자 발현의 차이를 이해할 수 있었습니다. 추가로 전기영동에 영향을 미치는 요인들에 대해서도 배웠습니다. 1. 단백질의 다양한 종류와 기능 단백질은 생명체에 필수적인 거대 분자로, 다양한 종류와 기능을 가지고 있습니다. 단백질은 아미...2025.01.18
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세포 배양 시 배지 교체 방법2025.01.081. 세포 배양 세포 배양은 생명체를 구성하는 조직으로부터 세포를 분리한 후 체외(in vitro) 환경에서 배양하는 것을 의미한다. 세포를 지속해서 배양하기 위해서는 세포를 떼어내어 세포 현탁액으로 만들고, 희석하여 새로운 배양용기에 plating하게 되는데 이를 계대배양(subculture)이라고 한다. 세포 배양에서 media 교체는 세포의 생존에 중요한 영향을 미치는데, 이는 media에 영양소가 풍부하게 들어있어 세포 증식에 필수적이며, 동시에 세포의 대사 활동으로 인해 발생한 노폐물이 배출되어야 하기 때문이다. 2. PB...2025.01.08
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단백질 풀림 실험 결과2025.05.091. 단백질 풀림 이번 실험에서는 단백질이 접힌 상태를 유지하는지, 풀리는지에 대해 판별하였다. 여러 종류의 시약들을 가하며 단백질의 풀림을 결정하였다. urea, 비눗물, HCl, NaOH, 에탄올 용액을 가했을 때 단백질이 풀렸다는 사실을 알 수 있다. 온도를 변화시키며 단백질의 풀림을 결정하였다. 단백질을 가열하면 수소결합과 소수성 상호작용이 파괴되고, 단백질을 냉각하면 소수성 상호작용이 약화되며 폴리펩타이드 사슬이 풀리게 된다. 2. chaotropic agent urea와 guanidine hydrochloride는 cha...2025.05.09
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생명과학실험1 Immunoprecipitation (IP)2025.01.171. Immunoprecipitation (면역침강법, IP) 면역침강법은 항원-항체 반응을 이용하여 원하는 단백질을 분리하고자 하는 실험이다. 단백질은 특정한 항체에만 결합하는 항체 특이성을 가지고 있으므로, 검출하고자 하는 target protein도 특정한 종류의 항체와만 결합하게 된다. 항원-항체 복합체가 바닥에 가라앉도록 하기 위해서 먼저 항체와 Bead를 붙이고, bead와 결합한 항체가 다시 단백질과 결합하여 단백질-항체-Bead 복합체를 형성하게 된다. 이 복합체가 원심분리를 통해 침강하게 되면서 원하는 단백질을 분리...2025.01.17
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지구의 형성과 생명체 진화2025.04.251. 지구의 형성 지구는 약 45억년 전 태양계에서 분리되었고, 그 이후 생물이 탄생되었다. 생물의 진화는 지구의 변화로 변화된 환경에 적응하기 위해 이루어졌다. 2. 지질시대 구분 지질시대는 이언, 대, 기, 세로 나뉜다. 이언은 은생 이언과 현생 이언으로, 대는 시생대, 원생대, 고생대, 중생대, 신생대로 구분된다. 기와 세는 대를 더욱 작은 시간 단위로 구분한 것이다. 3. 대기의 생성 원시대기는 지구 내부 가스(메탄, 암모니아, 수증기)로 구성되었고, 태양열로 인해 탄산가스와 질소로 변화되었다. 화산활동으로 원시바다에 생명체...2025.04.25
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