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[서강대학교 현대생물학실험2] (2차 풀레포트) TA cloning & transformation, mini-prep, Enzyme cut, electrophoresis2025.01.221. TA cloning TA cloning을 통해 insert를 삽입한 vector는 transformation을 이용해 세포에 주입하여 lacZ selection으로 insert 삽입 여부를 확인할 수 있다. lacZ operon이 작동하면 β-1, 4-linkage를 분해 시킬 수 있는 β-galactosidase가 생성된다. X-gal(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside)은 β-1, 4 linkage를 가지고 있으며 이 linkage가 분해되면 파란색을 띠게 된다. 2. Tra...2025.01.22
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제한효소와 아가로즈젤 전기영동/ Restriction Digest and Agarose Gel Electrophoresis2025.01.121. Plasmid DNA Plasmid DNA는 재조합 DNA 조작을 위한 운반체 DNA로 사용되며, 대장균에 vector를 삽입하는 과정을 Bacterial Transformation이라고 한다. 대장균 cell에는 plasmid DNA와 대장균 cell의 염색체 DNA인 chromosomal DNA가 독자적으로 존재하기 때문에 plasmid DNA를 따로 분리하는 과정을 Purification of plasmid DNA라고 한다. 일반적으로 Restriction enzymes를 처리하지 않은 plasmid DNA의 경우 ope...2025.01.12
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형질전환 실험보고서2025.05.041. 형질전환 형질전환은 외부에서 만들어진 plasmid를 plasmid가 없는 원핵 세포 cell에 넣어 그 원핵 세포가 본래 성질과는 다른 새로운 유전형질을 나타내게 하여 삽입한 plasmid를 대량으로 키우는 과정이다. 형질전환은 폐렴구균을 통해 DNA가 유전물질임을 PCR과 클로닝 등의 방법으로 증명했다. 인슐린의 경우 처음에는 돼지에게서 추출했지만 많은 수요에 비해 공급은 원활하지 못 했고 깨끗하지 않을 수도 있다는 의견 때문에 중지되었다. 그 후, 인간에게서 인슐린을 만드는 단백질(염기서열)을 찾아내어 인슐린을 공급할 방...2025.05.04
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PlasmidDNA Purification & Sanger Sequencing 보고서2025.01.211. Bacterial transformation 박테리아 transformation은 특정 DNA 조각을 박테리아의 유전체 내로 삽입하여 새로운 유전형질이 발현되도록 하는 방법입니다. 박테리아 plasmid는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site와 항생제 내성 유전자를 가지고 있어 외부 유전 물질을 자유롭게 삽입할 수 있습니다. 이를 통해 약 8kb의 긴 DNA 조각을 박테리아 plasmid에 삽입하여 복제할 수 있습니다. 2. Liquid LB culture 및 Colony inoculat...2025.01.21
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A+ 생화학실험 <5주차. Transformation> 레포트2025.01.201. Competent cell (DH5α) DH5α는 recA1 유전자의 160번 아미노산이 glycine에서 aspartic acid로 변이되는 돌연변이로 인하여 endonuclease의 기능을 상실하고 재조합 효소의 활성을 억제되었다. 이에 삽입된 plasmid DNA가 세포 내에서 안정적으로 유지되고 분해되지 않도록 하여, 높은 transformation efficiency(1×10^8 cfu/μg)를 가진다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 박테리아의 chromosomal DNA와 물리적으로 분리되어 있으...2025.01.20
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살모넬라증(Salmonellosis) 레포트2025.05.131. PFGE(Pulsed-Field Gel Electrophoresis) PFGE는 식중독이나 감염증을 일으키는 병원체 간의 감염원을 밝힐 때 사용하는 표준방법이다. Salmonellosis를 밝혀낼 때도 가장 신뢰할 수 있는 방법으로 사용된다. PFGE는 DNA가 커도 분리할 수 있기 때문에 일반 전기영동법과 달리 고전압으로 장시간 동안 영동하여 크기가 큰 DNA 단편을 분리할 수 있다. 이를 통해 미생물끼리 동일한 영동패턴을 나타내면 유전적 차이가 없고, 유래가 같을 가능성이 있다는 것을 알 수 있다. 2. Indole tes...2025.05.13
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서울대학교 A+ 생물학 실험 PCR, DNA technology2025.01.281. DNA 기술 DNA 기술은 생명과학 및 생명공학의 핵심적인 도구로, 유전 물질의 분석, 변형 및 조작을 가능하게 한다. 이러한 기술 중 특정 유전자를 vector라 불리는 plasmid에 삽입하고, 그 유전자의 복제본을 생산하는 기술인 DNA cloning, 전기영동을 통한 분석은 유전자 연구와 다양한 생물학적 응용에 있어 중요한 역할을 한다. 2. Plasmid DNA Plasmid DNA는 세균 내에서 독립적으로 복제할 수 있는 작은 원형 DNA 분자로, 염색체 DNA와는 별개로 존재한다. Plasmid는 외래 유전자를 운...2025.01.28
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[A+ 보장!] 연세대 의대 의예과 1학년 General Biology 실험 레포트 Plasmid DNA mini-preparation and gel electrophoresis2025.01.141. 대장균 대장균은 인간을 비롯한 동물의 대장과 소장에서 발견되는 박테리아의 일종이다. 대장균은 인간에게 해를 끼치지 않으며 오히려 영양분을 소화하고 흡수하는 과정에서 인간에게 도움을 준다. 하지만 경우에 따라 식중독이나 콜레라를 유발하는 병원균으로 작용할 수 있다. 대장균은 산소의 농도나 온도의 변화에 영향을 상대적으로 받지 않으며 다양한 물질로부터 에너지를 얻을 수 있는 능력이 있어 빠르게 번식하고 쉽게 죽지 않는다. 이러한 특징 때문에 대장균은 생명공학이나 유전체 연구에서 자주 사용되는 생물이다. 2. 플라스미드 DNA 추출...2025.01.14
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[A]서강대학교 현대생물학실험2_2차 풀레포트_TA Cloning과 Mini-Prep, Restriction enzyme & Gel electrophoresis2025.01.181. TA Cloning TA Cloning은 PCR을 거친 product의 3'에 존재하는 A overhang과 T vector의 3'의 T overhang의 상보성으로 인해 cloning을 진행하는 기법이다. Lac Z selection을 통해 blue colony와 white colony를 확인하여 insert DNA가 정상적으로 삽입되었는지 확인할 수 있다. Self-ligation을 줄이기 위해 alkaline phosphatase 처리나 T-overhang cloning protocol 수정 등의 방법을 사용할 수 있다....2025.01.18
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[생화학실험] (A+) Plasmid DNA isolation and characterization by electrophoresis2025.05.031. DNA DNA(Deoxyribo Nucleic Acid)는 뉴클레오타이드의 중합체인 두 개의 긴 가닥이 서로 꼬여있는 이중나선 구조로 되어있는 고분자화합물이다. DNA는 4종류의 뉴클레오타이드가 중합 과정을 통해 연결된 가닥으로 이루어져 있으며, 이 가닥은 Cytosine, Guanine, Adenine, Thymine은 독특한 핵염기(nucleobase)로 구분되기 때문에 흔히 DNA 염기서열이라고 부른다. DNA 염기서열은 유전정보를 나타내는 유전자 구간과 그렇지 않은 비부호화 DNA 구간으로 나눌 수 있다. 2. 재조합 ...2025.05.03
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