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RNA 추출 실험: Guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform 방법2025.11.171. RNA 추출 방법 및 원리 생물 샘플에서 RNA를 추출하기 위해 phase separation을 이용한 Guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction method를 사용했다. 옥수수 잎 조직을 액체질소로 급속 냉각하여 분쇄한 후 Tri-RNA reagent를 첨가하여 세포를 용해시킨다. Chloroform을 첨가하여 원심분리하면 상층의 맑은 aqueous phase에 RNA가 분리되며, isopropanol로 침전시킨 후 70% ethanol로 세척하여 순수한 RNA를 얻는다. ...2025.11.17
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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추위 노출에 따른 백색지방의 베이지화와 갈색지방 활성화 연구2025.11.181. qPCR을 이용한 유전자 발현 측정 qPCR(실시간 정량적 중합효소연쇄반응)은 RNA를 역전사효소로 cDNA로 변환한 후 실시간으로 증폭하는 기법입니다. 본 실험에서는 추위 노출 마우스와 일반 환경 마우스의 지방조직에서 Ucp1, Dio2, Tbp 유전자의 mRNA 발현량을 비교 측정했습니다. RT-PCR 단계에서 total RNA와 oligo dT, dNTP를 반응시킨 후 역전사효소, DTT와 혼합하여 cDNA를 생성하고, 이를 qPCR로 40 사이클 증폭하여 유전자 발현 수준을 정량화했습니다. 2. 백색지방의 베이지화와 갈...2025.11.18
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