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PlasmidDNA Purification & Sanger Sequencing 보고서2025.01.211. Bacterial transformation 박테리아 transformation은 특정 DNA 조각을 박테리아의 유전체 내로 삽입하여 새로운 유전형질이 발현되도록 하는 방법입니다. 박테리아 plasmid는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site와 항생제 내성 유전자를 가지고 있어 외부 유전 물질을 자유롭게 삽입할 수 있습니다. 이를 통해 약 8kb의 긴 DNA 조각을 박테리아 plasmid에 삽입하여 복제할 수 있습니다. 2. Liquid LB culture 및 Colony inoculat...2025.01.21
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[식품미생물공학실험] 미생물의 관찰 및 미생물의 증식2025.01.291. 현미경 관찰 기술 다양한 현미경 기술이 발전하면서 표본의 가시성이 향상되었고, 이는 식품·생명과학 분야에 큰 기여를 하고 있다. 광학 현미경, 형광 현미경, 위상차 현미경, 전자 현미경 등 관찰 대상과 실험 목적에 따라 적절한 현미경을 선택해야 한다. 형광 현미경은 UV 조사를 통해 발현되는 형광 물질을 관찰하지만, UV가 세포에 독성을 가질 수 있어 주의가 필요하다. 위상차 현미경은 시료의 특이적인 입사 및 산란 성분 차이를 이용해 염색 없이 세포 내부를 관찰할 수 있다. 전자 현미경은 전자 빔과 시료의 상호작용을 통해 표면...2025.01.29
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Western Blotting 레포트2025.01.211. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정입니다. 이 방법에는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antib...2025.01.21
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Cell harvest and protein assay2025.01.231. Cell harvest 세포 배양 시 adherent cell과 suspension cell로 구분할 수 있으며, adherent cell을 harvest하는 방법에는 화학적 방법(trypsin, accutase 사용)과 물리적 방법(scraper 사용)이 있다. 이번 실험에서는 물리적 방법인 scraper를 사용하여 adherent cell을 harvest하였다. 2. Protein extraction 세포 내 단백질을 추출하기 위해 lysis buffer와 phosphatase/protease inhibitor를 사용하여 ...2025.01.23
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Polymerase chain reaction2025.01.231. Polymerase chain reaction PCR(Polymerase chain reaction)은 단시간에 DNA의 원하는 부분을 수백만개 이상으로 증폭시키는 기술이다. PCR은 생물학의 거의 모든 분야에서 쓰이지 않는 곳이 없을 정도로 널리 퍼지고 중요한 실험적 기법이며, 그에 따라 상황과 목적, 기술발전에 따라 Multiplex PCR, Long-range PCR, Single-cell PCR등 수많은 파생 기술들이 존재한다. PCR은 크게 Denaturation, Annealing, Extension의 세 과정으로 ...2025.01.23
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A+ 생화학실험 <2주차. Pipetting & 50X TAE buffer preparation> 레포트2025.01.201. Pipetting Pipet은 액체의 부피를 정확하게 측정하고, 이동하기 위해 사용하는 실험 기구이다. 일반적으로 pipet은 대기압과 실험자가 조작하는 압력의 차이를 활용한다. 실험자가 pipet의 상단을 조작하여 내부 압력을 조절함으로써, 액체가 pipet 내부로 들어오거나 나가게 된다. Pipet에는 다양한 유형과 용량이 있으며, 사용 목적에 맞게 선택할 수 있다. Pasteur pipet, Graduated pipet, Volumetric pipet, Micropipette 등이 있으며, 각각의 특징과 용도가 다르다. ...2025.01.20
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PCR을 통한 gene structure 분석2025.05.011. EtOH Precipitation DNA는 전하를 띄는 인산골격을 가지고 있어서 극성이다. 물도 극성이므로 물에 잘 녹는다. DNA를 뭉치게 하려면 물과 DNA간 결합을 약화시켜야 한다. Ethanol은 물보다 훨씬 덜 극성이다. 따라서 ethanol을 첨가하면 DNA의 인산기와 다른 양이온간의 결합이 강해지면서 DNA 침전을 형성한다. 이 과정을 위해선 적절한 양의 양이온이 필요하다. 너무 많으면 DNA와 같이 침전되고 너무 적으면 침전되지 못한 DNA가 생긴다. 이 실험에선 3M sodium acetate를 final 0....2025.05.01
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생화학실험 단백질의 정성분석2025.05.061. Western blot Western blot은 단백질을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동을 이용하여 분리하고, 니트로셀룰로오스 membrane에 옮긴 후 찾고자 하는 단백질의 항체(1차 항체)와 결합시킨 후 이 항체와 반응하는 2차 항체를 이용하여 밴드를 형상화하는 기술이다. 이 기술은 크기별 분리, 단백질을 고체 지지체로 이동, 1차 및 2차 항체를 사용하여 표적 단백질을 표시하여 시각화하는 3가지 요소를 사용한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 질량에 의한 단백질 분리가 가능한 전기 영동법이다. 폴리아크릴아마이드...2025.05.06
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새로운 박테리아 종 동정을 위한 DNA 추출2025.05.081. DNA 추출 과정 본 실험에서는 미지 균주의 DNA를 추출하는 과정을 수행하였다. 균주를 PBS에 현탁하고 원심분리하여 세척한 뒤, lysozyme과 SDS를 처리하여 세포를 용균시켰다. 이후 PCI, chloroform을 이용하여 단백질과 불순물을 제거하고 에탄올 침전을 통해 DNA를 회수하였다. 최종적으로 0.1x SSC 완충액에 녹여 DNA 농도를 측정하였다. 그러나 260/280, 260/230 비율이 이상적인 수준에 미치지 못하여 순수한 DNA 추출에는 어려움이 있었던 것으로 나타났다. 2. DNA 추출 시약의 역할 ...2025.05.08
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세포 계수 및 배양접시 seeding2025.01.021. Hemocytometer를 이용한 세포 계수 Hemocytometer는 혈액 중의 적혈구, 백혈구, 호산구 등의 세포를 세기 위해 고안된 현미경 슬라이드입니다. Hemocytometer의 격자 구조와 틈새 높이를 이용하여 세포 현탁액의 농도를 계산할 수 있습니다. 또한 trypan blue 염색을 통해 살아있는 세포와 죽은 세포를 구분할 수 있습니다. 이를 통해 실험에 필요한 적절한 농도의 세포를 준비할 수 있습니다. 2. 세포 계수 방법 Hemocytometer 외에도 flow cytometry, CFU counting, s...2025.01.02
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