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분자생물학실험 Gene cloning_TAE buffer 제작2025.04.271. TAE buffer 제작 TAE buffer 제작(30ml 50X TAE buffer)의 목적, 재료, 방법 등을 자세히 설명하고 있습니다. TAE buffer는 DNA 전기영동에 사용되는 완충액으로, Tris, acetic acid, EDTA 성분으로 구성됩니다. 제작 방법은 각 성분의 양을 계산하여 증류수와 혼합하고 멸균하는 과정으로 이루어집니다. 2. PCR(중합효소 연쇄반응) PCR은 DNA 증폭 기술로, DNA 중합효소를 사용하여 원하는 DNA 염기서열을 대량으로 증폭시킬 수 있습니다. PCR에 필요한 주요 요소는 주...2025.04.27
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DNA 클로닝과 유전공학 기술2025.11.121. DNA 클로닝 기술 DNA 클로닝은 특정 유전자를 선택적으로 증폭하는 DNA 복제기술입니다. 제한효소로 DNA를 절단하고, 클로닝 벡터에 연결한 후, 숙주세포에 도입하여 DNA를 증폭시킵니다. 5단계 과정으로 진행되며: ①DNA 절단(제한효소 사용), ②벡터 선택(플라스미드, 바이러스), ③DNA 연결(DNA 리가제), ④숙주세포 이동, ⑤선별 배양입니다. 재조합 DNA 기술 또는 유전공학이라고도 불립니다. 2. 클로닝 벡터와 발현 벡터 클로닝 벡터는 DNA 증식 및 분리에 사용되며, 자가복제, 마커 선택, 제한효소 부위를 갖...2025.11.12
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포유동물 세포 배양 및 형질전환 결과2025.11.131. 포유동물 세포 배양 포유동물 세포 배양은 생체 외에서 포유동물 세포를 인공적인 환경에서 성장시키는 기술입니다. 적절한 배양 배지, 온도(37°C), 이산화탄소 농도(5%) 등의 조건을 유지하여 세포의 생존과 증식을 촉진합니다. 이는 의약품 개발, 백신 생산, 기초 생명과학 연구 등 다양한 분야에서 필수적인 기술입니다. 2. 형질전환 형질전환은 외부 DNA를 세포 내로 도입하여 세포의 유전적 특성을 변경하는 기술입니다. 포유동물 세포의 경우 전기천공법, 미세주입, 리포펙션 등의 방법이 사용됩니다. 이를 통해 특정 단백질을 발현하...2025.11.13
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Ni-NTA 친화성 크로마토그래피를 이용한 His-tagged 단백질 정제2025.11.161. Ni-NTA Agarose를 이용한 단백질 정제 6x-His tagged protein을 Ni-NTA agarose 수지를 이용하여 chromatography를 통해 정제한다. Histidine의 imidazole ring의 N 2개가 NTA에 결합된 Ni 원자에 결합하여 단백질이 정제된다. Washing buffer와 elution buffer에 포함된 imidazole은 competitive agent로 작용하여 contaminant protein과 bead의 결합을 줄이고 최종 순도를 높인다. 실험 결과 약 70kDa의 ...2025.11.16
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Taq DNA polymerase의 발현 및 정제, 확인2025.11.171. Taq DNA polymerase 발현 및 정제 Thermus aquaticus에서 분리한 Taq DNA polymerase는 높은 온도에서도 변성되지 않는 특성이 있어 PCR에 널리 사용된다. E.coli를 숙주세포로 사용하여 pTTQ18 vector에 삽입된 Taq DNA polymerase 유전자를 발현시킨다. IPTG를 첨가하여 lac operon을 활성화시켜 단백질을 과발현시킨다. 세포 파괴는 lysozyme을 이용한 효소적 방법과 계면활성제를 이용한 방법을 사용하며, 고온 처리로 다른 단백질을 변성시킨다. Ammon...2025.11.17
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