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단백질 검출2025.04.281. 단백질 검출 단백질은 탄수화물, 지질과 함께 생물체에 다량으로 포함되어 있으며, 세포의 지지, 운동, 물질 운송 기수를 구성하고 항체나 호르몬, 세포 생장 조절에 대한 분자로 활동하기 때문에 생명현상에 매우 중요하다. 이번 실험에서는 단백질을 검출하는 대표적인 방법 중 Biuret method를 이용하여 peptide 결합의 유무에 따라 검출이 가능한지 확인하였다. 2. 뷰렛 반응 (Biuret method) 뷰렛 반응 (Biuret method)은 2개 이상의 peptide 결합을 갖는 화합물, 즉 단백질이나 짧은 폴리 펩타...2025.04.28
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연세대학교 생화학실험(1) 6주차 Peptide Mass Fingerprinting In-gel Digestion2025.05.041. Peptide Mass Fingerprinting (PMF) Peptide Mass Fingerprinting (PMF)은 단백질 동정을 위한 기술로, 단백질을 효소로 절단하여 생성된 펩타이드의 질량을 측정하고 데이터베이스와 비교하여 단백질을 식별하는 방법입니다. 이 기술은 SDS-PAGE를 통해 분리된 단백질 밴드에서 시작되며, 밴드를 절단하고 효소로 소화하여 생성된 펩타이드의 질량을 질량분석기로 측정합니다. 이렇게 얻은 펩타이드 질량 데이터를 데이터베이스와 비교하여 단백질을 동정하게 됩니다. 2. In-gel Digesti...2025.05.04
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서강대학교 일반생물학실험1 실험 6. GFP 단백질과 단백질 정량 (Protein Measurements)2025.01.021. 단백질 정량 방법 실험에서는 Lowry assay와 Extinction coefficient assay 두 가지 단백질 정량 방법을 사용하여 EGFP의 질량농도를 측정하였다. Lowry assay는 Biuret reaction과 Folin reaction을 거쳐 750nm에서 흡광도를 측정하고 BSA 표준곡선을 이용하여 EGFP 농도를 계산하였다. Extinction coefficient assay는 EGFP의 몰흡광계수와 Lambert-Beer's Law를 이용하여 488nm에서 EGFP 농도를 직접 계산하였다. 두 방법의 ...2025.01.02
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서울대학교, 화학실험, 만점, A+, 펩타이드 질량분석 결과보고서2025.01.291. MALDI-TOF 펩타이드 질량분석 본 실험에서는 trypsin으로 가수분해한 단백질 샘플을 MALDI-TOF MS로 분석하여, 미지의 샘플이 lysozyme, BSA, ovalbumin 중 어떤 단백질에 해당하는지 알아내고자 하였다. 실험 결과, 미지의 단백질은 BSA로 확인되었으며, MALDI-TOF MS 데이터 분석 시 peptide coverage, miscleavage, 신호 대비 잡음 비율(S/N) 등을 고려하여 정확도를 높이는 것이 중요함을 알 수 있었다. 2. 펩타이드 질량지문(PMF) 단백질을 trypsin으로...2025.01.29
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[A+ 리포트] 세포생물학실험 - Subculture의 목적 및 정의, trypsin의 사용 이유 및 매커니즘2025.04.251. Subculture Subculture는 세포의 정상적인 증식을 위해 새로운 세포 배양 접시로 옮겨 세포의 대(generation or family line)를 계속해서 이어 배양하는 방법입니다. 세포 배양 접시 내에서 세포의 증식이 둔화되거나 멈추는 것을 방지하고 세포가 원활히 증식할 수 있도록 새로운 생장 환경을 제공하는 세포 실험적 기법입니다. 2. Trypsin Trypsin은 세포의 부착성을 제거하는 역할을 합니다. Trypsin은 세린 프로테아제로서 단백질의 펩타이드 결합을 끊어 세포 표면의 부착 단백질을 절단합니다...2025.04.25
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[화공생물공학단위조작실험1] 단백질 정량법 비교 (BCA, Bradford)2025.05.111. 단백질 정량법 단백질은 다양한 종류의 아미노산이 펩타이드 결합을 통해 형성된 고분자 화합물로, 결합 길이나 아미노산 종류에 따라 화학적∙물리적 성질이 다르다. 이러한 성질의 차이로 단백질 정량법의 종류도 다양하다. 정량법에는 Biuret assay, BCA assay, Bradford assay, 동위원소 희석 LC-MS method, 분광학적 정량법 등이 있다. 2. Biuret Assay Biuret(H2N-CO-NH-CO-NH2)구조가 알칼리성의 CuSO4와 반응하면 2가의 구리이온과 보라색의 착화합물을 형성한다. Biu...2025.05.11
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Western blot 실험 방법2025.05.101. Western blotting Western blotting (immunoblotting)은 샘플 내 특정 단백질의 존재 여부, 양, 크기를 측정하는 실험이다. 단백질이 소량이어도 검출 가능하고, 다양한 종류의 단백질이 혼합된 시료를 검사할 때도 항체의 기질 특이성 덕분에 원하는 단백질만 검출할 수 있다는 장점이 있다. 2. Western blot 실험 순서 Western blot 실험은 크게 5개의 순서로 이루어진다. 1) SDS-PAGE를 시행하여 단백질을 크기별로 분리, 2) 분리된 단백질을 membrane에 전이, 3)...2025.05.10
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[생화학실험]단백질 정량(Lowry 법)2025.05.041. 단백질 정량(Lowry법) Lowry법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu^{2+} 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. Cu^{2+} 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시켜 강한 푸른색을 생성한다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01～1.0㎎/㎖의 경우에 측정 가능하다. 2. Biuret 반응 두 개 이상의 펩티드 결합을 갖는 화합물들은 알칼리성 용액에서 황산구리로 처리하면...2025.05.04
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경북대_2023_1_생화학2_중간2025.05.061. oligosaccharide 우리몸이 사용하는 형태의 당은 monosaccharide이다. 탄수화물은 하이드록실기를 가진 탄소화합물로, monosaccharide는 한개의 비대칭중심에서 배열이 다른 당이다. 미생물의 세포벽을 이루는 아미노산은 L폼이 아닌 D폼인데, 이는 protease에 의해 분해되는 것을 막기 위해서이다. 당은 cyclic form과 sugar alcohol 형태로 존재하며, pyranose와 furanose 구조를 가진다. UV 조사로 인한 base damage가 발생할 수 있다. 2. monosaccha...2025.05.06
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단백질의 정량실험 Lowry method2025.01.201. 단백질 정량 단백질 정량은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 단백질의 본질, 시료에 있는 다른 성분들의 특성, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라 적당한 방법을 선택해야 한다. Lowry 법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 이용하여 단백질을 정량하는 방법으로, 감도가 비교적 넓고 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 2. Lowry 법 Lowry 법은 알칼리성 용액에서 단백질의 펩티드 결합과 구리...2025.01.20
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