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대장균에서 재조합 단백질 생산 및 정제2025.01.131. 재조합 단백질 생산 대장균 BL21(DE3) 균주는 재조합 단백질 고발현에 널리 사용되며, lac 프로모터와 T7 프로모터를 이용하여 IPTG 유도 하에 단백질을 발현할 수 있다. 본 실험에서는 pET28a 벡터를 사용하여 His-tag 융합 단백질을 생산하고, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피와 FPLC를 통해 단백질을 정제하는 방법을 익혔다. 2. 단백질 분석 SDS-PAGE를 통해 단백질 크기별 분리와 정제 과정을 확인하였고, Bradford assay로 단백질 농도를 정량하였다. 또한 DES와 OASS 효소 활성 측정을...2025.01.13
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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단백질 정제2025.01.231. 재조합 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 정제하려고 하는 단백질의 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입한 후, 이 플라스미드 벡터를 다시 세포에 도입하면 그 세포가 도입된 외부 유전자를 마치 원래 자기가 가지고 있던 유전자인 것처럼 발현을 하는 방법이다. 이번 단백질 정제실험에서 사용하는 플라스미드인 pET28a Vector는 kanamycin이라는 항생제에 대한 저항성을 부여하는 유전자인 KanR을 갖고 있어, 배양액에 kanamycin 항생제를 넣어놓고 그곳에 대장균을 넣으면 KanR을 갖고 있는 플라스미드인 pET28a Vec...2025.01.23
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Gene cloning 기술의 원리와 응용2025.11.141. Gene cloning의 정의 및 개념 Gene cloning은 생물체의 특정 유전자를 세포에서 추출하여 벡터 DNA에 삽입하고 Competent Cell에서 증식시킴으로써 균일한 유전자 집단을 생성하는 DNA 재조합 기술이다. 유전자 클론화라고도 불리며 특정 유전자의 대량 복제를 위해 사용되는 중요한 생명공학 기술이다. 이 기술은 분자생물학과 세포생물학 연구에서 각 유전자의 생물학적 기능을 이해하기 위해 필수적이다. 2. Gene cloning의 응용 분야 Gene cloning은 다양한 종의 유전체와 종간 유전적 다양성 연...2025.11.14
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레닌저 생화학 정리노트 Ch09. DNA 기반 정보기술2025.05.101. 유전체(genome) 생물의 완전한 하나의 반수체 유전자를 의미하며, 유전체학(genomics)은 DNA에 대한 학문으로 세포와 개체 수준에서 생화학을 연구하는 학문인 system biology에 기여한다. 2. 클로닝 유전자와 그 산물에 대한 연구를 위해 동일한 복제물을 만드는 것으로, 특정 개체의 복제물(organism cloning), 특정한 유전자나 DNA 단편의 복사물(DNA cloning)을 만들 수 있다. 재조합 DNA(recombinant DNA)는 2개 이상의 소스에서 공유 결합된 조각으로 구성된 복합 DNA ...2025.05.10
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[건국대학교] 의생명공학과 - 단백질공학 리포트(단백질조사)2025.01.151. Tissue Plasminogen Activator (tPA) Tissue Plasminogen Activator (tPA)는 혈중 plasminogen을 활성화하여 혈전을 용해시키는 plasmin으로 전환하는 과정을 촉진시키는 단백질(효소)입니다. Plasmin은 혈전을 분해하는 데 중요한 역할을 합니다. tPA는 주로 혈전성 질환 치료에 사용되는 혈전 용해제로, 혈관 내피세포에서 발견됩니다. 사람의 tPA는 약 70kDa의 분자량을 가지고 있습니다. tPA는 허혈성 뇌졸중, 급성 심근 경색, 급성 중증 폐동맥 색전증, 말초...2025.01.15
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담배 일시적 발현 시스템과 공동면역침전법2025.11.121. 담배 일시적 발현 시스템 (Tobacco Transient Expression System) 담배 식물을 이용한 일시적 단백질 발현 시스템으로, 식물 바이러스 벡터를 활용하여 외래 유전자를 식물 세포에 빠르게 도입하고 단기간에 고수준의 단백질을 생산하는 기술입니다. 이 방법은 재조합 단백질 생산, 백신 개발, 항체 생산 등 다양한 생명공학 응용 분야에서 효율적인 단백질 발현 플랫폼으로 활용됩니다. 2. 공동면역침전법 (Co-Immunoprecipitation, Co-IP) 단백질 간의 상호작용을 분석하는 생화학적 기법으로, 특...2025.11.12
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A+ 생화학실험 <13주차. His6-tagged Protein Purification> 레포트2025.01.201. 단백질 정제 단백질 정제(Protein Purification)는 생물학적 연구 및 산업적 응용을 위하여 단백질을 혼합물로부터 분리하고 정제하는 과정이다. 이 과정은 일반적으로 여러 단계를 거치며, 각 단계에서는 단백질의 용해도, 크기, 전하, 결합 친화도 등의 단백질 간 서로 다른 특성을 활용하여 단백질을 분리한다. 첫 번째 단계는 세포 용해(Cell Lysis)로, 세포벽을 파괴하여 세포 내의 단백질을 방출하는 것이다. 다음 단계는 affinity chromatography이다. 이 방법은 특정 단백질에 결합하는 리간드를 ...2025.01.20
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재조합 DNA 구성 및 대장균에서의 GFP 발현2025.11.121. 재조합 DNA 구성 재조합 DNA는 서로 다른 출처의 DNA 단편을 결합하여 새로운 DNA 분자를 만드는 기술입니다. 제한효소를 이용하여 DNA를 절단하고 DNA 리가제로 연결하는 과정을 통해 목적하는 유전자를 벡터에 삽입합니다. 이 기술은 유전공학의 기초가 되며 단백질 생산, 유전자 치료 등 다양한 분야에 응용됩니다. 2. GFP 형질전환 GFP(Green Fluorescent Protein)는 녹색 형광 단백질로, 자외선 또는 청색광에 노출되면 녹색 형광을 발합니다. GFP 유전자를 대장균에 형질전환하면 형광 단백질을 생산...2025.11.12
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Proteomics 중간 레포트입니다.2025.05.081. Human Epidermal growth factor (hEGF) Recombinant protein hEGF는 53개의 아미노산 펩티드로 구성된 단백질로, 세 개의 이황화 결합을 가지고 있습니다. hEGF는 EGFR 수용체에 결합하여 세포 증식, 분화, 이동과 관련된 주요 유전자의 활성화를 포함한 세포 내 신호 전달 경로를 개시합니다. 내인성 농도의 hEGF 생산이 매우 낮기 때문에(50ng/mL), 재조합 DNA 기술을 기반으로 대량의 hEGF를 생산하여 효율성과 생산성을 높이고 있습니다. hEGF 재조합 단백질 생산은 D...2025.05.08
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